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水稻抗瘟基因发掘及水稻—稻瘟菌互作研究具有重要理论和应用价值。本实验室前期将抗稻瘟病基因Pi40(t)初步定位于水稻第六号染色体,本研究对Pi40(t)进行抗谱分析,精细定位及BAC文库筛选,并对稻瘟菌效应蛋白MoCDIP4及其水稻互作蛋白OsDjA9进行功能分析与鉴定。主要研究结果如下：1、Pi40(t)抗谱分析与精细定位Pi40(t)供体品种IR65482-4-136-2-2对国内5个省份的23个稻瘟菌菌株均表现高抗,而阴性对照品种C039均表现高感,表明Pi40(t)可能为广谱抗稻瘟病基因。以IR65482-4-136-2-2与C039为亲本,构建F2遗传群体,使用稻瘟菌菌株318-2对该F2群体进行室内喷雾接种,获得1890株感病单株,利用覆盖Pi40(t)位点的15个分子标记对感病单株群体进行遗传连锁分析,最终将Pi40(t)精细定位于标记T3和CG5E-Pit之间,根据日本晴(Nipponbare)基因组信息分析,该物理区间为21 kb。利用与Pi40(t)紧密连锁的7个分子标记,对IR65482-4-136-2-2的BAC文库进行PCR筛选,获得了一个完整覆盖Pi40(t)位点的BAC克隆,通过测序及生物信息学软件预测,确定Pi40(t)位于包括3个NBS-LRR类型候选基因的47 kb区间内。2、MoCDIP4功能分析与鉴定MoCDIP4为本实验室前期研究筛选到的一个可诱导细胞凋亡的分泌蛋白。本研究分析了MoCDIP4超表达转基因菌株的致病性,结果表明过表达MoCDIP4会使菌株表现出更强的毒性；烟草异源表达MoCDIP4-YFP融合蛋白实验证实MoCDIP4分布于整个烟草细胞。3、MoCDIP4的水稻互作蛋白筛选与体外互作验证利用MoCDIP4为诱饵,筛选水稻品种日本晴的cDNA文库,获得了一个与其互作的蛋白OsDjA9,该蛋白归属于Hsp40家族(又被称之为J蛋白或是DnaJ)。 GST-Pull down实验证实了两者在体外互作。4、OsDjA9功能分析与鉴定通过分析接种稻瘟菌的OsDjA9表达谱,我们发现OsDjA9在亲和性反应中受到诱导,在非亲和性反应中则无明显变化,并且,OsDjA9能快速响应病原菌PAMP因子及热激胁迫；通过对OsDjA9超表达及RNAi干涉转基因植株进行抗性表型鉴定,我们发现过表达OsDjA9能增强植株抗性,沉默OsDjA9则对植株抗性没有影响；烟草异源表达OsDjA9-GFP融合蛋白实验证明OsDjA9定位于细胞膜以及胞间连丝。