骨折，疾病或先天性缺陷引起的骨缺损仍然是待解决的医学上重要的问题，随着人口老龄化的加快，骨科疾病频发引发的骨缺损患者人数不断增加。骨组织具有一定的自愈能力，但是骨缺损尺寸超过自愈的临界值时则很难愈合。此时临床上大多会采用植入骨缺损修复材料的治疗方法来促进骨缺损的修复。因此，临床工作中对骨缺损修复材料的需求也不断增加。目前临床上比较常用的骨缺损修复材料主要有3类：同种异体骨、自体骨和人工骨。但是其中一部分修复材料用于治疗骨缺损疾病又受到一定的局限，研制并选择出合适的且有效的解决骨缺损植入材料问题刻不容缓。有文献报道显示，现在已经研制出很多满足不同骨植入材料要求的产品，但是只有仅有少部分产品成功的在临床上应用于治疗骨缺损疾病。现在研究的部分生物材料存在或多或少的缺陷。因此，我们有必要进一步探索开发新的有应用潜能的骨生物材料，而无需添加外源性生长因子或细胞。拓展对生物材料的基础研究，为临床应用开发新的具有骨诱导性的生物材料提供理论依据。　　研究目的：　　通过体外细胞实验及体内动物实验研究本实验制作的脱钙脱细胞皮质骨基质的成骨效果，观察制备材料的结构特性，细胞毒性。探讨本实验制作的材料对细胞毒性及实验动物的促进成骨作用，为临床应用异种异体的脱钙脱细胞皮质骨骨基质修复非承重骨提供理论实验依据。脱钙脱细胞骨来源丰富，制备简单，并且具有良好的骨修复效果。　　研究方法：　　(1)材料制备：取新鲜兔骨，去除骨髓及其附着的软组织，经10％EDTA脱钙。制作成脱钙骨(DBM)，然后经过液氮冷冻10min，室温放置10min，重复3次。浓度为0.5％(v/v)的TritonⅩ-100处理24h，然后换浓度为0.5％(w/v)SDS处理24h。去除清洗液后换PBS清洗兔骨充分清洗10遍以上。此过程均在37℃恒温摇床(300rmp/min)上进行。兔皮质骨经过上述处理制备好脱钙脱细胞骨基质(DCDBM)。(2)材料特性：经过处理的材料上扫描电镜观察、DNA含量测定、HE切片染色考察材料的微观结构和脱细胞效果评估。(3)体外细胞实验：用出生2-3天SD乳鼠提取BMSCs，并培养到第3代以1×104个/孔种到96孔板。将制备的材料用75％酒精浸泡消毒。消毒后经无菌PBS浸泡24h期间换液3-4次。将消毒后的材料分为两组：脱钙组、脱钙脱细胞组用完全培养基浸泡24h。将BMSCs培养基吸除，换入两组浸泡液用于测试其细胞毒性。分别于1、2、3、5d用CCK8测试细胞活性。(4)体内动物实验：用SD大鼠构建颅骨缺损模型，共24只，每组8只，分为3组，8周和12周两个时间点每组各处死4只。分别为：空白组、脱钙组、脱钙脱细胞组。到8周、12周取材。经Micro CT扫描评估检测骨缺损修复效果。　　研究结果：　　(1)材料特性：制备出来的脱钙脱细胞骨基质材料颜色较脱钙骨颜色偏白，脱钙骨颜色偏黄。经扫描电镜观察经脱细胞处理后其表面的细胞团块被完全清除;矿物质被移除后经脱细胞处理后其胶原纤维的结构达到了完好的保留，显露出了较大的孔隙有利于细胞的迁移附着。DNA含量显著降低，HE切片显示细胞被完全清除。(2)细胞实验显示脱细胞骨基质材料浸泡液对BMSCs无毒性作用。(3)SD大鼠颅骨缺损模型中显示脱钙骨与脱细胞骨均有成骨效应，颅骨缺损修复效果前者比后者好。　　研究结论：　　兔皮质骨经过脱钙脱细胞处理后原有细胞得以清除、骨基质结构得以完好的保留且免疫原性降低。脱钙骨骨基质在大鼠体内具有一定的诱导骨形成能力，在经脱细胞处理后在体内能更好的诱导骨形成。为临床应用异种异体的脱钙脱细胞皮质骨骨基质修复非承重骨提供了实验理论依据。