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近年来,有关糖尿病的研究一直是国内外学者研究的热点和重点。由于目前市售的药物对糖尿病治疗作用有限,且大多为口服或注射降糖类西药,长期使用有一定的副作用。α-葡萄糖苷酶抑制剂通过竞争性抑制α-葡萄糖苷酶和双糖酶等与底物的结合,减缓多糖的吸收,从而达到降低血糖的目的,对Ⅱ型糖尿病患者尤其有效。从传统中医学考虑,提取天然植物或中药中有效成分,寻找一种安全、高效且无毒副作用的α-糖苷酶抑制剂,对于糖尿病的治疗和研究具有重要意义。本论文选用四川地区治疗糖尿病效果较好的灰兜巴为原料,探讨了灰兜巴中有效的α-糖苷酶抑制剂——灰兜巴多糖的提取和纯化工艺,研究了其体外抑制α-糖苷酶活性,以及对多糖的结构和分子量进行分析测定,为灰兜巴多糖的开发应用提供了实验基础和技术支撑。本论文的主要内容及结果如下:1、采用水提醇沉法研究了灰兜巴多糖的提取工艺,考察提取时间、提取温度和料液比对灰兜巴多糖提取量的影响;在单因素实验基础上,采用响应面法优化灰兜巴多糖的提取工艺,得到最佳提取条件为提取温度93.7oC、提取时间3.5h、料液比1:28.5,灰兜巴多糖的提取量达到22.90mg(/5g)。提取次数为2次。醇沉工艺研究结果表明,醇沉时间选择12h,乙醇醇沉浓度为80%时,多糖醇沉的效果较好。2、采用活性炭脱色,Sevage法脱蛋白对醇沉干燥后的多糖进行研究。结果表明,萃取次数为3次时,蛋白脱除效果较好,并且多糖保留率能达到90%。采用DEAE-52纤维素柱对灰兜巴多糖分离纯化后,得到三种组分多糖,分别为HDBP1、HDBP2和HDBP3。采用葡聚糖G-100凝胶柱纯化灰兜巴多糖HDBP2和HDBP3时,HDBP2有5个吸收峰,说明HDBP2中含有多种多糖;HDBP3有1个单一对称吸收峰,含有一种多糖,为纯品多糖。3、对HDBP1、HDBP2和HDBP3组分红外测定表明,HDBP1、HDBP2和HDBP3都具有明显的多糖特征吸收峰,为糖类化合物。紫外光谱分析表明3种多糖组分中蛋白和核酸均已脱除。GPC法得到HDBP1、HDBP2和HDBP3的分子量,HDBP1重均分子量为152895Da,HDBP2有3个峰,说明HDBP2不是均一组分,其重均分子量为93953Da,HDBP3有1个单一的相对对称峰,但峰形较宽,其多糖分子量分布为86749Da。4、对HDBP1、HDBP2和HDBP3组分进行抑制α-葡萄糖苷酶活性测定实验。结果表明,HDBP1没有抑制作用,HDBP2和HDBP3具有较好的抑制作用。HDBP2和HDBP3的IC50浓度分别为0.017mg/mL和0.0075mg/mL,而阳性对照阿卡波糖的IC50值为0.092mg/mL。表明HDBP2和HDBP3对α-葡萄糖苷酶的抑制效果均比阿卡波糖的抑制效果好,且HDBP3的抑制作用比HDBP2的抑制作用更强。5、HDBP3多糖单糖组成分析结果表明L-鼠李糖:D-岩藻糖:L-阿拉伯糖:D-木糖:D-甘露糖:D-葡萄糖:D-半乳糖的摩尔比为2.33:1.58:1.00:1.37:4.86:4.00:7.30。高碘酸氧化后,高碘酸的消耗量为0.3339mmol,甲酸的总生成量为0.0701mmol。HDBP3多糖中1→、1→6糖苷键约占多糖连接键的37.39%,占可氧化糖苷键的41.99%。Smith降解后,产物中含有鼠李糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。降解产物中没有岩藻糖、阿拉伯糖和木糖,说明岩藻糖、阿拉伯糖和木糖都是以可氧化的键型存在,如1→、1→6、1→4或1→4,6连接。而鼠李糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖以不被氧化的1→3、1→2,3、1→2,4、1→3,4、1→3,6以及1→2,3,4键型存在。