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目的:缺血再灌注损伤为一常见且复杂的病理生理现象,目前其发病机制尚未完全阐明,有效的防治方法亦在探索中。他克莫司是目前临床常用的一种重要免疫抑制剂,在使用过程中,有学者发现它有可能具有改善缺血再灌注损伤的特性。本课题旨在研究他克莫司对大鼠肾缺血再灌注损伤Fas、Caspase-3蛋白表达的影响,并初步探讨其作用机制。
方法:选择健康雄性Wistar大鼠60只,体重220~260g。动物随机分为3组:假手术(Sham)组,缺血再灌注(I/R)组,他克莫司处理(FK506+I/R)组,每组20只Wistar大鼠,每组又按再灌注时间分为再灌注后0.5 h,2h,6 h,24 h4个观察时相,每个观察时相5只。假手术组仅开腹、分离肾动脉,不阻断血流;缺血再灌注组于缺血前6 h经尾静脉注射生理盐水1ml;他克莫司处理组于缺血前6 h经尾静脉注射他克莫司注射液(0.5mg/kg)。到达设定的再灌注时间点取下腔静脉血及肾脏标本,检测各组大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量。同时用光学显微镜观察各组大鼠肾组织病理变化以及用免疫组化法检测Fas、Caspase-3蛋白的表达,对结果进行统计学分析。
结果:1.血清SOD、MDA的变化:在相应再灌注各时间点,他克莫司处理组和I/R组的血清SOD水平均低于假手术组。与假手术组比较,I/R组血清SOD水平显著降低。他克莫司处理组与I/R组血清SOD水平有统计学意义。在再灌注6h、24h,假手术组与他克莫司处理组也有统计学意义。与假手术组比较,I/R组随再灌注时间延长,大鼠血清MDA水平逐渐增高,6h达到峰值。他克莫司处理组血清MDA水平低于I/R组(P<0.05)。2.肾组织病理学观察:肾缺血再灌注损伤后肾小管上皮细胞形态和肾小管结构发生明显的病理改变。他克莫司预处理后上述病理改变有了显著改善。3.肾组织中Fas蛋白的表达:I/R组在再灌注的各时间点表达均高于假手术组,在再灌注2h、6h、24h,Fas蛋白表达显著高于假手术组(P<0.05),I/R组和他克莫司处理组的差异有统计学意义;再灌注6h、24h假手术组与他克莫司处理组差异有统计学意义。4.肾组织中Caspase-3蛋白的表达:I/R组在再灌注的各时间点表达均高于假手术组,在再灌注2h、6h、24h,Caspase-3蛋白表达显著高于假手术组(P<0.05),I/R组和他克莫司处理组的差异有统计学意义;再灌注24h假手术组与他克莫司处理组差异有统计学意义。
结论:在肾缺血再灌注损伤中,他克莫司具有抑制Fas、Caspase-3蛋白表达的作用,可以提高内源性SOD的活性以及降低MDA的含量,对大鼠肾缺血再灌注损伤具有保护作用。