妊娠期糖尿病胎膜中水通道蛋白mRNA表达的研究

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目的:水通道蛋白(aquaporins, AQPs)是一组与液体跨细胞膜流动相关的蛋白家族,由一系列具有同源性的内在膜蛋白组成。自1991年Arg等完成了对AQP1的克隆和鉴定,迄今为止,已经从哺乳动物组织中鉴定出了13种水通道蛋白,即AQP0、AQP1~12,称为水通道蛋白家族。他们广泛的存在于动物、植物、微生物机体组织细胞中,尤其与液体分泌和吸收有关的上皮细胞和内皮细胞含量丰富,参与水的分泌、吸收及细胞内外水的平衡,属古老的跨膜通道蛋白家族。妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus, GDM)是指妊娠期间首次出现或发现的糖尿病。其发病率世界各国报道差异很大,我国为3~6%。大多数患者产后糖代谢异常能恢复正常,但将来患糖尿病的机会增加。妊娠期糖尿病的临床经过复杂,对母儿均有较大危害,须引起重视。近年来,国内、外学者研究发现,AQP1、3、9在胎盘、绒毛膜及羊膜中均有表达,且提出他们都是介导大量水分子顺渗透压梯度跨细胞膜转运的重要通道,虽然AQPs在各种代谢性疾病中引起水平衡紊乱已有大量研究,但其在糖代谢异常孕妇胎膜中的表达及其与糖代谢异常时出现的羊水平衡紊乱的关系尚未见报道。本研究拟通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术与免疫发光法研究AQP1、3、9基因在妊娠期糖尿病患者胎膜中的表达、监测糖代谢异常孕妇空腹血糖及空腹血胰岛素水平,比较两者间的相关性,探求水通道蛋白在妊娠期糖尿病影响胎膜变化及羊水量异常的可能机制,对寻找和预防由糖代谢异常引起的羊水量变化导致的高危妊娠有重要意义。水通道蛋白期望成为一种新的诊断指标和靶向药物。方法:1研究对象选择我院产科病房足月妊娠(37-40周)发生妊娠期糖尿病者7例设A组;正常足月妊娠者7例作为对照设B组。两组受试对象为单胎孕妇,其孕周与年龄差别无统计学意义。诊断标准参照6版《妇产科学》。排除标准:两组孕妇均排除慢性高血压、妊娠期高血压疾病、心脏病、肝肾疾病及其它免疫系统疾病;排除新生儿畸形及羊水量异常。2标本采集受试对象在分娩前抽取清晨空腹静脉血,测量身高、体重;在分娩或剖宫产术胎盘娩出后立即于无菌条件下去除其表面血迹及羊水,留取胎膜两块,大小约1.0*1.0cm2,用磷酸缓冲液(PBS)彻底冲洗3次后,立即将组织置入液氮速冻后,贮藏于-80℃超低温冰箱保存待测。3实验方法采用逆转录聚合酶链反应半定量技术检测胎膜中水通道蛋白1、3、9mRNA的表达。采用免疫发光法测定静脉血空腹胰岛素及空腹血糖的水平。4采用SPSS13.0进行统计学分析,实验数据为正态分布,所有数据方差齐,采用2样本t检验。P﹤0.05认为有显著性差异。结果:1实验组及对照组均有水通道蛋白1、3、9的mRNA表达。2 AQP3、9两种亚型在两组中表达水平有显著性差异(P﹤0.05),AQP1在两组中未发现有显著性差异(P﹥0.05)。3两组中空腹静脉血胰岛素的水平无显著差异(P﹥0.05)。两组中空腹血糖有明显差异,两组中空腹血糖与胎儿体重呈明显正相关,由于样本例数的原因,其与空腹胰岛素、体重指数未发现有明显相关性。结论:1水通道蛋白1、3、9mRNA在人妊娠足月胎膜中有表达2水通道蛋白3、9mRNA在妊娠期糖尿病组的孕妇胎膜上的表达水平明显高于正常组孕妇胎膜的表达水平,而水通道蛋白1在两组中的表达无明显差异。3胎膜中水通道蛋白的分子结构、表达的强弱以及在细胞中的分布位置共同参与羊水的动态平衡4妊娠期糖尿病组的患者胎儿体重空腹血糖呈明显正相关,由于样本例数的原因未发现空腹胰岛素及孕妇体重指数与空腹血糖有明显相关性。
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