RNAi沉默CDC2基因增强胃癌SGC-7901细胞株奥沙利铂药物敏感性的实验研究

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胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,在世界范围内,胃癌也是各种癌症相关死亡发生的第二位肿瘤类型,在我国也有着很高的发病率及死亡率。早期胃癌尚可通过手术等方式治愈,晚期胃癌将很难治愈,且患者生存期较短,由于胃癌症状隐匿,早期不易发现,大多数胃癌确诊时已经处于晚期,尽管现在有很多新的分子靶向药物和免疫治疗手段,它们给晚期胃癌治疗提供了新的治疗策略,但是全身化疗仍然是晚期胃癌的最主要治疗方式。以奥沙利铂为基础的化疗方案,在胃癌治疗中占据重要地位,但许多患者先天或后天对铂类药物产生耐药性,严重降低了铂类药物的疗效,限制了其在临床应用。因此寻找胃癌对铂类药物敏感性相关基因很有必要,可以为预测胃癌患者以铂类药为基础的化疗方案疗效及制定个体化治疗方案提供一定的理论依据,可为胃癌治疗提供新的靶点,提高铂类药物对胃癌的化疗效果甚至逆转胃癌患者铂类耐药,从而为患者带来获益。细胞分裂周期基因(CDC),是一类与细胞周期调控密切相关的基因,它们控制细胞周期及各时相的转换,其中以CDC2最为重要,它是唯一在细胞周期2个控制点(G1/S和G2/M)起作用的CDC基因,CDC2表达异常的现象存在于多种恶性肿瘤中,其可能与恶性细胞的形成、增殖及其抗药性有内在联系。本文将探讨CDC2在胃癌细胞株中的差异性表达与胃癌细胞株对奥沙利铂敏感性的变化,从而揭示CDC2在奥沙利铂治疗胃癌中的作用。目的:探讨利用RNAi沉默CDC2基因对人胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响。方法:针对CDC2基因的DNA设计并人工构建3条具有特异性的干扰片段CDC2SiRNA1、CDC2 SiRNA2、CDC2 SiRNA3,利用脂质体转染技术转入胃癌SGC-7901细胞,同时设立空白对照组及阴性对照组;利用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测筛选出干扰效果最佳的片段;CCK8法检测下调CDC2表达后细胞的增殖活力以及不同浓度奥沙利铂处理后各组胃癌细胞的增殖抑制率,并计算半抑制浓度(IC50)。结果:CDC2SiRNA1、CDC2 SiRNA2、CDC2 SiRNA3 3组胃癌SGC-7901细胞中CDC2 mRNA表达水平较空白对照组下调了35%,53%和85%,干扰效果最佳的CDC2 siRNA3组的CDC2蛋白相对表达量为及0.227±0.015,明显低于空白对照组及阴性对照组的0.848±0.025、0.842±0.016(P<0.05),因此选择CDC2siRNA3干扰片段用于后续实验。用siRNA3干扰片段转染胃癌细胞下调CDC2表达可以明显抑制胃癌细胞的生长活性,降低其增殖能力,且在72-96h达到平台期,实验组细胞的增殖活力要明显低于空白对照组及阴性对照组细胞(P<0.05)。不同浓度的奥沙利铂作用于各组SGC-7901细胞24h,CDC2 SiRNA3组的增殖抑制率显著低于空白对照组及阴性对照组(P<0.05),3组细胞的IC50分别是3.91、6.58和6.68μmol/L。结论:下调CDC2基因的表达水平可增加胃癌SGC-7901细胞对奥沙利铂的敏感性,为增强胃癌奥沙利铂敏感性提供一个可选择的靶点。
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