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最新研究表明,银杏双黄酮具有抗氧化、抗病毒和抗癌等药理活性,但双黄酮检测缺少标样和方法。单组分银杏黄酮和萜内酯也是国际新药开发研究的热点。本论文以银杏叶提取物为初始原料,经提取、分离、纯化得到上述各类物质粗品,利用C18制备柱,结合核磁共振分析,开展单组分双黄酮标样、单组分黄酮苷元、萜内酯和银杏酸制备,分离得到11种mg级高纯单组分化合物,探索色谱条件,优化制备工艺。(1)在优化银杏叶提取物分离工艺前提下,反溶剂结晶纯化,得到双黄酮总含量为80.4%的预备样,回收率62.9%。对预备样进行色谱制备分离,得到4种单组分双黄酮:阿曼托黄素31 mg、白果素38 mg、金松双黄酮51 mg、异构体银杏黄素与异银杏黄素混合物87 mg,一次制备总量达到207 mg,总得率为87.1%。采用峰面积归一法得到其纯度分别为:98.45%、98.66%、98.87%和99.29%,符合标样纯度要求。单组分双黄酮标样的最佳色谱制备条件为:分别加入0.005 mol/L冰醋酸和三氟乙酸改善峰形,76%甲醇溶液→甲醇梯度洗脱,洗脱速度20 mL/min,上样量10 mL,分离次数2次。用其测定白果、银杏叶和外种皮中双黄酮总含量(mg/g),分别为:0.01 mg/g、6.98 mg/g和2.31 mg/g。(2)对黄酮苷元进行色谱制备分离,得3种单组分黄酮苷元,一次制备槲皮素28.59 mg、山奈酚22.87 mg、异鼠李素4.92 mg,纯度分别为99.8%、99.2%和99.7%,总得率89.4%。其最佳色谱制备条件为:在流动相中加入0.005 mol/L冰醋酸和0.005 mol/L三氟乙酸,60%甲醇等度洗脱、洗脱速度20 mL/min、上样量20 mL,分离次数2次。(3)对纯化处理后的银杏酸进行分离,一次制备4个单组分银杏酸:氢化白果亚酸203.3 mg、白果酚30 mg、白果酸121.3 mg、白果二酚10.1 mg,总计337.7mg,一次制备得率84.5%,色谱纯度分别为:100%、96.2%、94.1%、98.3%。单组分银杏酸的最佳色谱制备条件为:92%甲醇溶液等度洗脱,洗脱速度18 mL/min,上样量为10 mL,分离次数1次。(4)采用大孔树脂对前期分离萜内酯粗品进行纯化,得到纯度为85.1%的待分离萜内酯样品,收率75.2%。采用C-18制备柱对萜内酯进行分离,得到白果内酯和银杏内酯C混合物61.1 mg,纯度达90.4%,得率42.6%;得到银杏内酯B和银杏内酯A混合物50.7 mg,纯度达85%,得率35.3%。其色谱制备条件为:梯度洗脱20%甲醇→60%甲醇梯度洗脱,洗脱速度20 mL/min,上样量10 mL,分离次数1次。