背景:过敏性疾病已成为国内外关注的公共卫生问题。过敏性鼻炎(AR)近年来发病趋势明显增加,不仅严重影响人们生活质量,更是哮喘等重大疾病的重要诱发因素。中医药治疗过敏性鼻炎,在改善临床症状及预防复发等方面的优势得到了人们认可。目前上市的中成药大多以治疗急慢性鼻炎为主,较少有针对过敏性鼻炎治疗者。针对AR主要证型的经验方的研究及新药开发则很有意义。目的:通过回顾性研究分析鼻鼽主要证型,基于动物实验评价其临床有效方剂双辛鼻鼽散(SXBQS)及其有效活性成分的药效药理机制。1.分析鼻鼽患者中医临床证型的分布及构成情况,提炼主要证型。2.制备BN大鼠及Balb/C小鼠过敏性鼻炎模型。3.评价SXBQS药效,探讨其时效-量效关系及药理机制。4.研究SXBQS中黄芩苷(BAL)药代动力学。5.研究SXBQS活性成分BAL的抗过敏药效及机制。方法:1.采用回顾性分析方法,收集2015年1月至2016年12月期间王庆国教授门诊244例鼻鼽患者,建立CRF表,整理患者主要信息,应用计算机进行数据录入与分析,根据辨证分型标准统计患者证型,总结提炼主证型。2.采用腹腔注射致敏和鼻内滴注激发的方法分别制备卵清蛋白(OVA)诱导的BN大鼠及Balb/C小鼠AR模型。根据鼻部行为学、血清IgE含量、鼻粘膜病理形态学评价模型。3.统计SXBQS给药后不同时间点各组大鼠喷嚏、挠鼻次数,基于鼻部行为学指标初步探讨SXBQS时效-量效关系。药效学及机制:检测各组大鼠血清中IgE、组胺、IFNγ、IL-4、IL-5、IL-17及鼻腔灌洗液中IgE、组胺、IL-4含量;HE及甲苯氨蓝染色检测鼻粘膜组织炎症细胞浸润。4.SXBQS 灌胃后 30 min,1h,2 h,3 h,4 h,6 h,8 h,10 h,12 h 大鼠尾尖定量取血,利用BAL酶联免疫分析方法(ELISA)研究SXBQS中BAL药代动力学。将药代动力学与鼻部行为学结果进行曲线拟合,初步分析BAL药代学-药动学相关性。5.BAL药效学:(1)比较各组行为学差异;基于激光多普勒技术评价鼻粘膜血流量变化;检测血清IgE、组胺含量;HE及甲苯氨蓝染色检测鼻粘膜组织炎症细胞浸润;流式细胞术检测小鼠脾细胞中Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞、Treg细胞比例。(2)通过检测不同时间点OVA致敏大鼠鼻腔灌流液中Evens blue含量,分析BAL对BN大鼠鼻粘膜毛细血管通透性的影响。结果:1.证候分型:鼻鼽发病集中于中年人群,男女比例为1:1.6。临证少有单一证型发病患者,两证相兼者以肺肾两虚证最多;多数患者是三证相兼,研究据此提出鼻鼽发病由内外合邪而致,以肺肾两虚为根本,可分别兼夹风邪外袭、脾阳亏虚、胆经郁热。2.模型评价:(1)行为学评价:BN大鼠及Balb/C小鼠AR模型鼻部行为学评分与空白对照组均有显著差异。生理盐水激发后,各组BN大鼠行为学差异无统计学意义;OVA溶液及组胺激发后5 min内,BN大鼠模型组喷嚏、挠鼻次数较空白对照组明显增加,差异有统计学意义。(2)模型组动物血清IgE均较空白对照组显著升高,且鼻粘膜组织有明显的炎症细胞浸润。3.SXBQS量效-时效关系:(1)1h激发,SXBQS高、中剂量及西替利嗪组鼻部症状较模型组明显缓解;(2)4h激发,SXBQS各剂量及西替利嗪组鼻部症状较模型组缓解,SXBQS高剂量组及西药组与模型组有差异;(3)8h激发,SXBQS高剂量及西药组喷嚏、挠鼻次数较模型组减少,差异有统计学意义;(4)12h激发,SXBQS高剂量组可缓解鼻部过敏症状,与模型组有差异。4.SXBQS药效及机制:(1)SXBQS各剂量组及西替利嗪组大鼠体重无差异,均较空白对照组降低;各组大鼠脾重基本无差异。(2)SXBQS高、中剂量组可明显抑制鼻粘膜组织炎性细胞浸润,减轻粘膜水肿。(3)血涂片结果提示,SXBQS高、中剂量及西替利嗪组嗜酸性粒细胞较模型组减少。(4)血清学指标:SXBQS各剂量组及西替利嗪组IgE均较模型组下降,其中SXBQS高、中剂量组与模型组差异有统计学意义;SXBQS各剂量组及西替利嗪组血清组胺含量均较模型组降低,高剂量组及西替利嗪组与模型组有差异;SXBQS高剂量组可显著降低IL-5水平;SXBQS各剂量组及西替利嗪组不同程度上调血清IFNγ水平、降低血清IL-4、IL-17水平。(5)鼻腔灌洗液:SXBQS高剂量及西替利嗪组显著降低鼻腔灌流液总蛋白浓度;SXBQS高、中剂量及西替利嗪组IgE含量较模型组降低;各组大鼠鼻腔灌洗液组胺含量无明显差异;各组IL-4水平有不用程度回降,SXBQS高剂量组与模型组差异有统计学意义。5.建立了 BAL的ELISA检测方法,线性范围在31.25 ng·ml-1～1000 ng·mL-1,回收率在93.58-107.18%之间(平均99.42%),RSD<10%,符合生物样品检测要求。SXBQS中BAL在灌胃后2-3 h出现第一个峰值,高中低剂量显示线性药代动力学特征。药动与药效相关性分析提示SXBQS缓解BN大鼠鼻部过敏症状,BAL可能发挥了重要作用。6.BAL药效:(1)西替利嗪及BAL高、中剂量均能降低小鼠喷嚏、挠鼻次数。(2)西替利嗪组及BAL高、中剂量组鼻粘膜层水肿减轻,嗜酸性粒细胞浸润减少;西替利嗪组及BAL各组肥大细胞均有不同程度减少。(3)西替利嗪及BAL高、中剂量组可降低AR模型血清IgE水平。西替利嗪及BAL各剂量组均可降低血清中组胺含量。(4)流式细胞结果:BAL高剂量组Th1细胞比例增加,与AR模型组差异有统计学意义;BAL各剂量均可下调Th2细胞比例;AR模型组较空白对照组Th17细胞比例升高,BAL高剂量可下调Th17细胞比例;西替利嗪及BAL高、中剂量可上调Treg细胞比例。(5)LDF结果:与空白对照组相比,AR模型组鼻粘膜血流量显著下降。西替利嗪及BAL高剂量组可上调鼻粘膜血流量。(6)鼻粘膜血管通透性结果:鼻腔灌流30min时AR模型组大鼠鼻腔灌流液伊文斯蓝含量最多,与空白组有显著差异,BAL可以降低灌洗液中伊文斯蓝含量,与模型组差异有统计学意义。结论:1.提出鼻鼽核心病机为肺肾两虚,在此基础上有外风、脾虚、郁热之异。2.SXBQS灌服后1h即起效,起效时间超过12h,长于西替利嗪。SXBQS可以缓解AR模型鼻部过敏症状,降低血清IgE、组胺含量,减轻鼻粘膜炎症细胞浸润,且成剂量依赖性,初步证明了 SXBQS治疗AR的药效。SXBQS各组可不同程度地上调IFNy表达,并下调IL-4、IL-5、IL-17的表达,说明SXBQS有可能通过调控T细胞平衡发挥抗过敏效应。SXBQS还可明显降低鼻腔灌流液IL-4含量,推测SXBQS不仅可整体免疫调节,对AR鼻腔局部治疗也比较敏感。3.鼻部行为学评分与黄芩苷含量有良好的相关性,推测黄芩苷可能是SXBQS抗过敏药效的主要活性成分之一。4.BAL可缓解小鼠AR模型鼻部过敏症状,减少鼻粘膜炎症细胞数量,降低血清IgE、组胺含量,初步证明了 BAL有治疗AR的作用。BAL可上调Th1、Treg细胞,下调Th2、Th17细胞,说明其可调控Th细胞平衡。鼻粘膜血流量及血管通透性实验进一步验证了 BAL抗组胺效应。