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研究背景:泛素-蛋白酶体途径（ubiquitin—proteasome pathway,UPP）是真核细胞中ATP依赖的非溶酶体蛋白降解途径,广泛参与细胞质及细胞核内多种蛋白质的降解过程,尤其是一些短寿命的细胞周期调节蛋白、癌基因、抑癌基因产物及一些异常折叠的蛋白等,并具有高效性及高选择性,在蛋白质的质量控制中发挥重要作用。VCP（valosin-containing protein）是一种Ⅱ型AAA-ATP酶,细胞内含量丰富且结构保守,可作为分子伴侣参与泛素-蛋白酶体途径。有研究提出泛素-蛋白酶体途径在恶性肿瘤的发生中起重要作用。本文通过检测食管癌患者血清中VCP水平及蛋白酶体水平,探讨泛素-蛋白酶体途径在调解食管癌的发生、发展中的作用,为早期发现肿瘤及治疗提供重要的依据。研究目的:应用VCP抗原免疫白兔,制备VCP多克隆抗体,并应用ELISA法及western印迹法检测食管癌患者血清中VCP水平及蛋白酶体水平,探讨蛋白酶体及VCP在食管癌中的变化情况及临床意义,并分析两者间的相关性,以期为以后肿瘤的诊断、治疗及疗效观察提供帮助。研究方法:1、血样采集共有37例食管癌病人被纳入实验,均为2008年7月至2009年2月在山东大学齐鲁医院放疗科住院治疗的初治食管癌患者,排除合并有其他已证实会造成蛋白酶体水平异常的疾病的患者,且所有患者均接受完成根治性放疗,放疗前后采集空腹静脉血作试验用。30例正常人被纳入对照组,所有人均排除肿瘤及自身免疫性疾病,亦采取空腹静脉血作对照。2、VCP抗体的制备及检测利用常规免疫方案用VCP抗原免疫新西兰大白兔,制备VCP抗体,利用ELISA技术检测其效价。3、血清中VCP水平及蛋白酶体水平测定用制备好的VCP抗体作为一抗,利用ELISA方法检测食管癌患者血清中VCP水平,并用兔20S蛋白酶体α5多亚基抗体作为一抗检测食管癌患者治疗前后血清中蛋白酶体水平及正常人血清中蛋白酶体水平。并应用western bloting法鉴定血清中蛋白酶体水平。4、统计分析应用简明统计分析10.34软件进行数据分析,采用t检验、秩和检验、方差分析、直线回归检验等进行显著性差异检验。以P＜0.05表示有显著性差异,具有统计学意义。研究结果:1、37例食管癌患者中男29例,女8例,男女比例3.6/1,年龄36-84岁,平均年龄64岁,37例患者均经电子胃镜检查,取活检病理确诊为食管鳞状细胞癌,所有患者治疗前均有CT检查结果,按CT结果采用Moss等食管癌分期法对食管癌分期,其中Ⅰ期5例,Ⅱ期13例,Ⅲ期14例,Ⅳ期5例。2、用VCP抗原常规免疫大白兔后,ELISA技术检测大白兔血清中VCP抗体效价)1:80003、ELISA法测定食管癌患者及正常人血清中VCP水平及蛋白酶体水平后,应用统计学方法检验后,发现食管癌患者血清中蛋白酶体水平及VCP水平与正常人均有显著性差异（结果分别为P=0.0015及P=0.0026）;应用直线相关回归分析,发现食管癌患者血清中蛋白酶体水平与VCP水平存在正相关性（P=0.0226）;Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ期患者之间血清中蛋白酶体水平无显著性差异（P＞0.05）,但均与Ⅳ期患者血清中蛋白酶体水平存在显著性差异（P＜0.05）;食管癌患者经根治性放疗后,血清中蛋白酶体水平发生显著性下降（P=0.0125）;治疗后近期疗效评价,有效组下降较无效组明显（P=0.0135）。4、western印迹法鉴定蛋白酶体水平发现食管癌患者特异的蛋白条带灰度较正常人明显增强。研究结论:1、利用VCP抗原免疫新西兰大白兔,可制备出高效价的VCP多克隆抗体。2、食管癌患者血清中蛋白酶体的水平较正常人明显增高,且病期越晚,蛋白酶体的水平越高,给予放疗后其水平降低,且降低程度与近期疗效有关,提示食管癌与泛素-蛋白酶体活性的增强有关,且血清蛋白酶体水平与肿瘤负荷大小呈正相关,可作为食管癌诊断及监测肿瘤病情变化的参照指标。3、食管癌患者血清中蛋白酶体的水平与VCP水平呈正相关,提示VCP参与泛素-蛋白酶体途径的作用。