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前言1975年人们从猪脑抽提液中分离出具有内源性吗啡样活性的蛋氨酸脑啡肽(Methionine enkephalin, MENK)。后来研究发现是阿片类物质受体的内源性配基,能够和阿片受体结合使人或动物产生轻微镇定和止痛作用,是一种体内自然生成的物质,由肾上腺产生的前激素和前脑啡肽衍生来。近年来研究表明,MENK通过与免疫细胞上阿片受体结合调节免疫系统功能,免疫调节作用包括增加免疫系统T淋巴细胞、NK细胞、巨噬细胞活性,增加细胞因子IL-2、γ-干扰素释放等,MENK还抑制肿瘤细胞生长。已有研究证明MENK单独或与其它细胞因子如：IFN-γ联合应用能显著增强机体免疫细胞的功能,MENK对癌症和艾滋病患者的治疗研究取得了显著的疗效。检测患者外周血中的CD4+T细胞亚群的数量有明显增加。阿片受体分为μ(mu)、δ(delta)、κ(kappa)等几种亚型。有研究证明MENK在不同情况下,可以通过多种途径将信号传递到细胞内,不同剂量有可能导致MENK结合不同的受体,信号传递主要途径就可能发生变化,对不同细胞可以产生不同的生物学效应,特别是显示不同免疫学剂量效应关系。CD4+T细胞是体内特异性细胞免疫的重要细胞亚群,有报道MENK可以显著增加CD4+T细胞的活性和数量,但是具体剂量效应关系未见报道。本实验采用不同浓度MENK体内、外刺激小鼠CD4+T细胞,运用流式细胞术计数CD4+T细胞的数量,运用半定量RT-PCR技术检测小鼠CD4分子的mRNA的含量,摸索出MENK体内、外刺激小鼠CD4+T细胞增殖的最佳浓度。探讨不同浓度的MENK对CD4+T细胞的增殖作用的影响,为MENK的临床应用提供理论和实验依据。实验方法1、流式细胞术检测不同处理组CD4+T细胞数量用不同浓度的MENK体内、外刺激小鼠,无菌分离脾淋巴细胞,采用流式细胞术计数CD4+T细胞的数量。体内、外各实验组小鼠CD4+T细胞数量分别与对照组进行t-检验,所得数据采用SPSS 11.5软件进行统计分析。2、半定量RT-PCR检测不同处理组CD4分子mRNA的含量用不同浓度的MENK体内、外刺激小鼠,无菌取小鼠脾淋巴细胞,磁珠负选试剂盒分离纯化CD4+T细胞,采用半定量RT-PCR技术检测CD4分子mRNA的含量,所得CD4分子的mRNA相对表达强度与对照组进行t-检验,所得数据采用SPSS11.5软件进行统计分析。结果1、体外10-9M到10-12M的MENK和体内200mg／kg的MENK促进小鼠CD4+T细胞增殖(p<0.05)；体外10-5M的MENK抑制CD4+T细胞增殖(p<0.05)；体外10-6M到10-8M、10-13M和10-14M的MENK,体内50mg／kg和100mg／kg的MENK对小鼠CD4+T细胞增殖无明显变化(p>0.05)。2、体外10-9M到10-12M的MENK和体内200mg／kg的MENK促进小鼠CD4分子mRNA的转录(p<0.05)；体外10-5M的MENK抑制小鼠CD4分子mRNA的转录(p<0.05)；体外10-6M到10-8M、10-13M和10-14M的MENK,体内50mg／kg和100mg／kg的MENK对小鼠CD4分子mRNA的转录无明显变化(p>0.05)。结论1、10-9M到10-12M的MENK体外刺激显著促进小鼠CD4+T细胞的增殖。浓度过高抑制小鼠CD4+T细胞的增殖,浓度过低CD4+T细胞增殖无明显变化。2、200mg／kg的MENK是理想的体内促进小鼠CD4+T细胞增殖的浓度。3、上述结论均在mRNA水平得到认证。