酒精性肝损伤严重威胁我国乃至世界人民身体健康,然而目前部分临床上用于治疗酒精性肝损伤的药物有副作用大或者疗效不佳等缺点,因此从中药材中寻找副作用小的抗酒精性肝损伤天然产物用于开发新型酒精性肝损伤药物变得至关重要。霍山石斛是我国传统名贵中药,具有滋阴、益胃生津、主伤中、补五脏等功效,且现代药理学研究发现霍山石斛茎可以改善酒精性肝损伤,而霍山石斛花是否也具有抗酒精性肝损伤作用尚未见报道。因此本论文将探索霍山石斛花是否具有抗酒精性肝损伤活性,筛选其发挥抗酒精肝损伤作用的活性单体并阐明其作用机制,本论文的研究内容及结果主要有以下几个方面:（1）霍山石斛花乙醇提取物抗酒精性肝损伤活性评价。霍山石斛花干粉用95%乙醇进行冷浸提取,提取物经浓缩后得到粗提物DHFE。采用乙醇诱导的L02肝细胞损伤模型对DHFE进行活性评价,CCK8检测结果显示DHFE预处理可显著提高乙醇诱导的L02肝细胞存活率,表明DHFE具有改善酒精性肝损伤作用。（2）霍山石斛花抗酒精性肝损伤活性部位筛选。DHFE经萃取后获得4个极性部位:PE部位（DHFE-A）、CH2Cl2部位（DHFE-B）、Bu OH部位（DHFE-C）、H2O部位（DHFE-D）,采用乙醇诱导的L02肝细胞损伤模型对DHFE及其4个极性部位DHFE-A～D进行活性评价及比较,CCK8检测结果显示DHFE-B～D均可显著提高乙醇诱导的L02肝细胞存活率,其中DHFE-C段给药后细胞存活率上升最高,确定DHFE-C段为霍山石斛花抗酒精肝损伤活性部位。（3）霍山石斛花抗酒精性肝损伤活性部位单体化合物分离纯化和结构鉴定。利用现代分离纯化技术对活性部位DHFE-C段进行分离纯化,共分离出5个单体化合物,利用NMR、MS技术对分离出的单体化合物进行结构鉴定,结果显示化合物H-1（2-phenylethyl-β-D-glucoside）、化合物H-2（benzyl-O-β-glucopyranoside）为芳香族化合物,化合物H-3（isorhamnetin-3-O-β-D-galactoside）、化合物H-4（isorhamnetin-3-O-β-D-glucopyranoside）、化合物H-5（quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside）为黄酮类化合物。（4）单体化合物抗酒精性肝损伤活性筛选。采用乙醇诱导的L02肝细胞损伤模型对单体化合物进行活性评价,CCK8检测结果显示化合物H-3、H-4、H-5给药后均可显著提高乙醇诱导的L02肝细胞存活率,并且在一定范围内给药浓度和细胞存活率呈正相关,而化合物H-1和H-2无活性。全自动生化分析结果显示,化合物H-3、H-4、H-5给药后均可显著降低乙醇诱导的L02肝细胞上清中ALT、AST水平。上述结果表明化合物H-3、H-4、H-5具有抗酒精肝损伤作用活性,可能是霍山石斛花发挥抗酒精肝损伤作用物质基础。（5）活性单体对酒精性肝损伤保护作用机制研究。Annexin V-FITC结果表明单体H-3、H-4、H-5给药后均可显著降低乙醇诱导的L02肝细胞凋亡率,Western Blot分析结果表明H-3、H-4、H-5均可显著增加乙醇诱导的L02肝细胞Bcl-2/Bax水平,降低cleaved caspase-3表达,说明H-3、H-4、H-5可以通过抑制肝细胞凋亡而发挥抗酒精性肝损伤作用。试剂盒检测抗氧化指标结果表明:H-3、H-4、H-5均可显著降低乙醇诱导的L02肝细胞MDA、ROS水平,增加SOD、GSH-Px水平。RT-PCR和Western Blot分析表明H-3、H-4、H-5均可显著提高乙醇诱导的L02肝细胞Nrf2蛋白及其下游基因HO-1、NQO1、GCLC和GCLM m RNA表达水平。CCK8检测Nrf2抑制剂ML385对各活性单体抗酒精性肝损伤作用的影响,结果表明ML385可显著抑制H-3、H-4、H-5的抗酒精性肝损伤活性。上述结果证明活性单体H-3、H-4、H-5可以通过激活Nrf2信号通路发挥抗氧化活性从而改善酒精性肝损伤。RT-PCR和Western Blot分析表明活性单体H-3、H-4、H-5均可显著降低乙醇诱导的L02肝细胞i NOS、COX2、TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA表达以及NF-κB信号通路p-IκBα、p-p65蛋白表达。CCK8检测NF-κB抑制剂SC75741对各活性单体抗酒精性肝损伤作用的影响,结果发现SC75741对H-3、H-4、H-5的抗酒精性肝损伤活性无明显影响。上述结果证明活性单体H-3、H-4、H-5可以通过抑制NF-κB信号通路发挥抗炎活性从而改善酒精性肝损伤。上述作用机制研究结果表明活性单体H-3、H-4、H-5可以通过激活Nrf2信号通路并抑制NF-κB信号通路,发挥抗氧化及抗炎活性,进而抑制乙醇诱导的肝细胞凋亡,最终发挥抗酒精性肝损伤作用。