水稻Os-miR396过表达转基因植株的获得及可能功能分析

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microRNA对动植物的正常发育有着非常重要的调节作用。然而,目前植物microRNA的功能研究主要是集中在拟南芥中。本实验以粳稻日本晴为实验材料,试图通过过表达转基因手段研究10个水稻microRNA的功能。这10个水稻microRNA的靶基因分别为F-box蛋白、GRF(Growth regulational factor)以及未知蛋白等等,预期功能分别为影响开花时间、调节茎的长短以及与信号转导和逆境胁迫相关等等。根据靶基因的功能,对这10个microRNA进行探索性研究。取得的主要研究结果如下:1.根据microRNA前体基因的结构特点,设计引物,成功从水稻基因组利用PCR扩增出了Os-miR396等10个microRNA的前体基因,并将其构建在UbiI水稻组成型启动子之下。2.以UbiI组成型启动子驱动,将带有目的基因的过表达载体通过冻融法转入农杆菌,再经农杆菌介导来转化水稻愈伤,通过潮霉素筛选得到抗性愈伤组织,经分化再生获得了OS-miR396的T0代转基因植株。3.经形态学考察,过表达OS-miR396的T0代转基因植株具有明显的矮化性状,其最高高度仅有野生型的一半。在T1代,部分转基因种子晚萌发5-7天,随后的苗期阶段,均呈现出发育迟缓、植株矮化等特点。4.对转基因植株进行基因组DNA的PCR鉴定,确定含有外源的目的片段。
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