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目的: 胃癌是人类常见的恶性肿瘤之一，死亡率高居世界癌症第二。化疗是治疗胃癌的有效措施之一，但仍有超过50％的胃癌晚期患者对以紫杉醇为基础的化疗方案不敏感。低毒高效的中药单体有望提高机体对紫杉醇化疗的敏感性。此次研究旨在探讨熊果酸(ursolic acid，UA)增强人胃癌细胞对紫杉醇(paclitaxel)敏感性的调控作用及可能的机制，为中西医结合治疗胃癌提供实验依据。 方法: 体外实验:采用CCK-8(cell counting kit-8，CCK-8)法检测药物对细胞增殖的影响，利用金氏Q值法判断联合用药指数;采用AnnexinⅤ-PE双染法和Hochest33258染色法观察细胞凋亡情况;采用荧光定量PCR(realtime fluorescencequantitative PCR，RTFQ PCR)法检测紫杉醇组、熊果酸组和联合用药组中P-gpmRNA、Akt1 mRNA、NF-κB mRNA基因的表达;采用蛋白印迹(Western Blot)法检测p-Akt、Akt、P-gp、NF-κB、Bcl-2、bax、CD44等蛋白表达量;采用无血清法富集人胃癌BGC-823成球细胞;采用Hoechst33342染色法观察成球细胞富集情况;采用平板克隆实验检测成球细胞形成克隆能力;采用Transwell小室法检测成球细胞迁移能力。 体内实验:将裸鼠分为BGC-823细胞组和BGC-823成球细胞组，采用皮下注射法建立裸鼠模型。采用免疫组化法观察瘤体中p-Akt、P-gp蛋白的表达。 结果: 体外实验:(1)单药熊果酸和紫杉醇均可抑制人胃癌BGC-823成球细胞的增殖，随着药物浓度的增加，细胞抑制率亦不断增强。小剂量的熊果酸与紫杉醇协同作用最明显(Q=2.36)，AnnexinⅤ-PE双染法和Hochest33258染色法检测细胞的凋亡，结果证明联合用药可以诱导更多细胞凋亡;(2)荧光定量PCR结果显示，联合用药组Akt1 mRNA、P-gp mRNA、NF-κB mRNA的表达量较紫杉醇单药组减少（P＜0.05）;蛋白质印迹实验提示，联合用药组p-Akt和Akt、P-gp、NF-κB、Bcl-2蛋白表达量较紫杉醇单药组明显下调（P＜0.01）;(3)采用无血清悬浮培养法成功获得胃癌成球细胞，成球细胞具有干细胞表面特异标志物（P＜0.001）、对Hoechst33342拒染、药物敏感降低性(P＜0.05)、单克隆形成能力和迁移能力强(P＜0.05)等生物学特性;(4) RT-PCR检测显示BGC-823成球细胞Akt1、P-gp表达较BGC-823细胞升高，统计学差异明显(P＜0.05)。 体内实验:BGC-823成球细胞的成瘤能力更强，免疫组化显示BGC-823成球细胞组瘤体中p-Akt、P-gp蛋白表达较BGC-823组增强。 结论: (1)熊果酸能增强紫杉醇对胃癌细胞化疗作用的敏感性，其作用机制可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路的活化，下调P-gp，最终促进细胞凋亡有关;(2)无血清法可以有效富集人胃癌BGC-823干细胞;(3)熊果酸可增强人胃癌异质性细胞胃癌干细胞对紫杉醇的敏感性，可能与下调p-Akt、P-gp的表达有关。