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番茄黄化曲叶病是番茄上一种重要的病毒病害,近年来该病的肆虐危害给我国番茄生产造成了巨大的损失。在江苏,番茄黄化曲叶病最早于2007年出现发生危害报道,之后该病陆续扩散蔓延,成为限制当地番茄产业发展的重要因素,导致该病的主要病原为番茄黄化曲叶病毒(TYLCV),典型症状包括叶片上卷、黄化等。2013年,我们在江苏南京番茄上发现一种新的番茄黄化曲叶病,与以往报道的番茄黄化曲叶病不同,该病在番茄上的主要症状表现为叶片皱缩、叶脉肿大及叶背耳突。我们对其伴随的粉虱传双生病毒进行了检测,结果显示该病常常伴随一种粉虱传双生病毒,对其DNA-A组分进行了克隆和序列测定,BLAST及聚类分析发现,该病毒为番茄黄化曲叶病毒,结果显示该病毒分离物为环状单链DNA,全场2781个碱基,包括6个ORFs,分别编码V1、V2、C1、C2、C3和C4。对其进行BLAST及聚类分析发现,该病毒为番茄黄化曲叶病毒,与以往报道的番茄黄化曲叶病毒江苏分离物序列同源性非常高(>99%),未发现明显的变异／重组位点,但是该病的症状与以往报道的由TYLCV引起的番茄黄化曲叶病症状差别很大,怀疑可能还存在其他组分。为了研究TYLCV编码的C4基因功能及其在TYLCV侵染及致病过程中的作用机理,我们对TYLCV编码的C4基因进行了克隆并构建了酵母双杂交载体pGBK-C4(无毒性及自激活现象),以其为诱饵筛选番茄cDNA文库,共计筛选到541个候选阳性克隆,对其中的210个克隆进行了序列测定,利用GenBank数据库中已有的番茄基因组信息进行注释,分析筛选到的互作基因编码蛋白种类及ORF完整性,获得10种C4互作蛋白：两种热激蛋白(Heat shock protein)、两种核糖体蛋白(Ribosomal protein)、两种Rubisco小亚基(Rubisco small subunit)、一种过氧化氢酶(Catalase)、一种金属硫蛋白(Metallothionein)、一种乙酰辅酶A羧化酶载体运输蛋白(Biotin carboxyl carrier protein of acetyl-CoA carboxylase)和一种F-box蛋白(F-box protein)。根据文库筛选结果,我们从番茄体内克隆了Rubisco蛋白小亚基(s1RbCS)并对其与C4的互作进行了研究。s1RbCS序列分析结果显示其N端存在信号肽,所以我们分别构建了s1RbCS和Δs1RbCS(去除信号肽)的酵母双杂交载体,在缺陷型培养基上研究其与pGBK-C4的互作,结果显示s1RbCS与ΔslRbCS都能与C4互作,s1RbCS在叶绿体中是CO2固定过程中关键蛋白,虽然其不直接参与叶绿素合成,但是有些研究结果显示RbCS沉默后会导致植株叶片出现黄化等症状,因此推测C4与slRbCS的互作可能参与了TYLCV侵染寄主番茄后产生黄化症状这一过程。