论文部分内容阅读
目的:将脂肪来源基质血管成分(SVF)与颗粒软骨复合,作为一种软骨修复材料,探讨其对兔耳软骨缺损修复的影响,为临床软骨缺损的治疗提供实验依据和治疗方法。方法:1.采用组织分离法从新西兰兔双侧腹股沟区获取脂肪,从提取的脂肪中获得基质血管成分(SVF),并用CM-DiL荧光染料标记SVF,取一个月后SVF组的组织块标本,在避光条件下立即予以冰冻切片(厚度为5um),200倍荧光显微镜下观察,予549nm绿光激发,观察CM-Dil标记的SVF(红色荧光)。2.建立软骨缺损动物模型。在新西兰兔双侧耳廓做出五个软骨全层缺损的创面,通过大体观察与组织学观察(HE染色和甲苯胺蓝)软骨缺损的情况。3.颗粒软骨制备:将取得软骨片用钢尺测量成0.5cmx0.5cm剪成1x1mm大小软骨颗粒,备用。4.实验分组。取新西兰兔24只,于每只新西兰兔双耳廓制作5处大小为1.0x1.0cm全层软骨缺损,随机分为5组。A组,空白对照组;B组,颗粒软骨组;C组,SVF组;D,SVF+颗粒软骨组;E组,块状软骨组。分别于术后1月、2月、3月取材,进行大体、组织学观察(HE染色及甲苯胺蓝染色)。5.对各组各时间段标本通过组织学修复评分行统计学分析。结果:1.一个月后,取SVF组的标本,通过荧光显微镜可观察到CM-Dil标记的SVF,表明SVF提取细胞中含有脂肪干细胞。2.制备的1mm颗粒软骨,便于进行自体软骨移植。3.移植后效果观察结果。A.空白对照组:HE染色显示纤维组织填充,无新生软骨细胞生成。甲苯胺蓝染色显示细胞外基质无明显异染性。大体观察4周、8周表面不规则,无正常软骨形成。12周软骨缺损瘢痕愈合。B.颗粒软骨组:HE染色显示有新生软骨细胞形成,可见结缔组织纤维包裹。甲苯胺蓝染色显示可见细胞外基质异染性。大体观察,4周、8周可见软骨颗粒与正常的软骨组织部分融合,软骨缺损凹陷变浅。12周软骨缺损表面欠平整,软骨缺损基本修复,软骨颗粒融合成片,可见软骨生成。C.SVF组:HE,染色可见新生软骨细胞生成。甲苯胺蓝染色显示基质呈异染性。大体观察见缺损区有一层膜状物形成,有大量新生软骨细胞形成,对缺损有一定的修复作用。D.颗粒软骨组+SVF组:HE染色显示颗粒软骨周围可见大量的新生软骨细胞形成。甲苯胺蓝染色显示基质呈异染性。大体观察表面较光滑,接近周围正常软骨厚度,能与正常软骨完全融合。E.块状软骨移植:HE染色可见块状软骨周围可见新生软骨细胞形成,细胞外基质轻度减少。大体观察表面较光滑,接近正常软骨厚度,与周围软骨融合。但少许块状软骨移植出现翘曲。结论:1.脂肪源性的SVF联合颗粒软骨能有效的修复兔的耳软骨缺损。2.制备成颗粒软骨后,有利于软骨的再生及软骨缺损修复。颗粒软骨移植后能与周围组织很好融合并形成整体,无明显吸收,软骨活性、骨化情况相对稳定。3.SVF能够促进软骨的再生。