秋茄(Kandelia candel)根系对盐胁迫响应的差异蛋白分析

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红树林是分布生长在热带海岸潮间带的木本植物群落,在亚热带海岸也有分布。红树林在维护海岸生态平衡上发挥着重要作用。红树林的生长环境独特复杂,土壤基质盐度高,根系和茎常年都处在海水的浸泡中,涨潮时甚至整棵都被海水淹没。红树植物在长期的高盐环境中进化出一套与陆生植物和淡水生植物不一样的独特的耐盐机制。本文在前人关于红树植物在形态、生理生化耐盐机理研究的基础上,在生理生化及分子水平上,尤其是后基因时代蛋白质组学上对红树植物秋茄的抗盐性进行研究分析。在测定盐胁迫下秋茄根系的生理生化指标的基础上,采用双向电泳、质谱技术、生物信息学手段比较分析不同浓度盐胁迫下红树植物秋茄根系蛋白质的差异变化,并对差异蛋白表达模块进行分类,研究其和耐盐的相互关系,从而揭示红树植物的耐盐蛋白质功能网络。成熟的红树植物秋茄(Kandelia candel)长至4-6叶后,以Hoagland营养液为母液用NaCl配成4个不同的盐浓度(0mmol/L(对照),150 mmol/L,300 mmol/L,600 mmol/L),胁迫处理时间为3天整(即72h),之后采集秋茄幼苗的根,用于生理生化指标的测定和蛋白质的提取。主要测定不同盐胁迫下秋茄根脯氨酸含量、MDA含量、SOD酶活性。并进行蛋白质双向电泳(2-DE)分离,获得四张的双向电泳图谱,经过双向电泳图谱的扫描,PDQuest软件进行蛋白点的检测和统计分析,分别找出不同盐胁迫下秋茄根的差异表达蛋白。选取25个蛋白丰度表达变化在2倍以上的差异蛋白点进行MALDI-TOF/TOF-MS分析,其中7个蛋白上调表达,2个下调表达,还有16个蛋白呈现波动变化。数据库检索后,共鉴定出19个蛋白,鉴定率为76%,它们的功能分别涉及能量代谢(31%)、抗氧化作用(11%)、蛋白质代谢(11%)、逆境相关蛋白(11%)、核酸代谢(5%)、氮代谢相关蛋白(5%)、未分类蛋白(26%)。在生理生化测定的基础上,运用蛋白质组学研究方法与技术,比较秋茄根在不同盐胁迫作用下蛋白质组的差异。通过对红树林的耐盐过程中差异表达蛋白的功能分析,为培育耐盐植物品种提供分子生物学基础,对解决土壤盐渍化问题有着重要意义。
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