T4DNA连接酶与γ-谷氨酰转移酶电化学传感器的构建

来源 :南京大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qlin08
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
基因工程常用的工具酶T4 DNA连接酶,以及在谷胱甘肽代谢中起重要作用的γ-谷氨酰转移酶都是非常重要且基础的酶类,它们的表达异常将严重影响生物的生命活动,并且与许多疾病密切相关。本文中,我们利用电化学手段,并且使用金纳米颗粒进行信号放大,分别构建了检测T4 DNA连接酶以及γ-谷氨酰转移酶活性的电化学传感体系。相比于一些传统的酶活性检测方法,本文构建的这两种酶传感器具有高灵敏度、高选择性以及低成本的特点,因此对于医疗诊断有一定的参考价值。   1.T4 DNA连接酶活性的电化学传感器的研究   T4 DNA连接酶是一种基因工程中常用的工具酶,它在DNA复制、损伤修复、基因重组的过程中都起到了十分重要的作用。本章中,我们在金电极表面设计了一种DNA“三明治”结构,在这一结构中,两段DNA分别修饰在金电极和金纳米颗粒表面,在T4 DNA连接酶的催化下,两段DNA发生连接,从而将金纳米颗粒共价连接到金电极表面。由于金纳米颗粒具有很大的比表面积,能够负载大量的电化学信号分子--二茂铁,因而可以起到信号放大的作用。通过获取的二茂铁电化学信号,我们建立了可以检测T4 DNA连接酶活性以及靶DNA点突变的电化学体系,不仅为基因工程提供了便利,而且对于一些疾病的诊断也具有一定的指导意义。   2.γ-谷氨酰转移酶活性的电化学传感器的研究   γ-谷氨酰转移酶是生物体内谷胱甘肽代谢的相关酶之一,血清中γ-谷氨酰转移酶的活性可作为肝胆疾病相当灵敏的指示剂而应用于临床诊断。在本章中,我们利用γ-谷氨酰转移酶的催化特性,并综合考虑各种氨基酸的电化学性质,设计了该酶的两种反应底物,并使它们在γ-谷氨酰转移酶的催化下进行反应,得到的产物谷氨酰酪氨酸甲酯含有一个自由羧基和一个酪氨酸残基。由于自由羧基可以与预先在金电极表面构建的自由氨基发生缩合反应,从而使得谷氨酰酪氨酸甲酯连接到电极上,又由于酪氨酸残基能够在电极表面被氧化而产生电化学信号,因此,我们构建了一种不需要另外添加电化学探针的γ-谷氨酰转移酶活性检测体系,并有望发展成为肝胆疾病临床检验一种新的技术手段。
其他文献
弓形虫蛋白激酶ROP18是弓形虫致病力决定性的毒力因子之一,但其作用的关键宿主靶蛋白和介导的免疫相关致病机制仍有待阐明。为了系统地研究ROP18的关键宿主靶蛋白,利用酵母表达
随着节能标准的不断提高,白光LED凭借其发光效率高、寿命长、体积小、绿色环保等优点必将成为未来照明的主要光源,同时必将带动LED驱动器的不断革新与发展。因此,具有效率高
数字电视是在研究高清晰度电视的基础上提出并发展起来的,由于它与模拟电视相比具有诸多优点,必然是将来电视信号发展的方向.视频图像采集系统中数字电视信号解码电路根据解
本文主要分析和研究光调制器中的行波电极.第一章根据高速率光通信系统的要求,介绍了行波型光调制器,并从晶体的电光效应出发,分析了波导型电光调制器的工作原理.第二章基于
该论文主要研究以太网新技术10G以太网的收发模块原理和应用,论文的主要内容包含如下:●第一章介绍了以太网的关键技术和发展以来的技术改进.●第二章分析了万兆以太网的网络
为了实现波束的宽带宽、大角度扫描,传统相控阵雷达使用微波延迟线进行延时补偿,但是微波延迟线存在着对信号衰减大,抗干扰能力差,体积大等诸多问题。为了解决这些问题,近年
本文通过对荣华二采区10
期刊
该论文主要关注于多路E1透明传输以太网的技术.论文主要分为四部分.第一章概述了以太网在E1上透明传输的意义.第二章介绍了封装协议.封装协议是为完成以太网在E1上的透明传输
本文针对目前工业现场控制系统存在的不足,提出了基于高速智能化现场总线的嵌入式PC控制系统,该系统具有高速、智能化的通讯能力和可以直接嵌入到工业设备中的小巧体积。 首
有机薄膜电致发光(Electroluminescence,EL)是当今国际上研究、开发和产业化的一大热点,得到工业界和学术界的大量投入,并取得了令人瞩目的发展成果.有机EL具有超薄、主动发