【摘 要】
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桑天牛Apriona germari(Hope)是我国农林重要蛀干害虫之一,对多种林果植物造成严重经济损失。为减少传统防治技术对化学药剂的大量使用,探索桑天牛无公害控制技术至关重要。化学通讯是昆虫寄主选择、配偶识别、交配及寻找产卵场所等行为的重要方式,深入了解其生殖行为特点及两性通讯的嗅觉机理,是开发桑天牛行为调控策略的重要途径。本研究应用行为学和电生理学技术探明桑天牛交配行为特点及其配偶识别器官
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桑天牛Apriona germari(Hope)是我国农林重要蛀干害虫之一,对多种林果植物造成严重经济损失。为减少传统防治技术对化学药剂的大量使用,探索桑天牛无公害控制技术至关重要。化学通讯是昆虫寄主选择、配偶识别、交配及寻找产卵场所等行为的重要方式,深入了解其生殖行为特点及两性通讯的嗅觉机理,是开发桑天牛行为调控策略的重要途径。本研究应用行为学和电生理学技术探明桑天牛交配行为特点及其配偶识别器官,通过分子生物学及生物信息学技术鉴定并分析桑天牛外生殖器上的嗅觉相关蛋白基因及其组织表达差异,筛选交配行为中关键嗅觉基因,为进一步揭示桑天牛生殖行为机制奠定基础。本研究取得成果如下:(1)观察发现桑天牛日活动行为具有一定规律:全天活动以取食和休息为主,爬行、飞行、抱握及交尾行为发生较少,且取食行为白天高于晚上,爬行和飞行行为晚上高于白天;不同时间段内,桑天牛雌成虫静息主要发生在凌晨3:30-6:30,爬行和飞行主要发生在晚上19:30-3:30,取食主要发生在傍晚16:30-19:30;雄成虫静息主要发生在白天10:30-16:30,爬行、飞行及取食主要发生时间与雌虫一致;抱握及交尾行为主要发生在白天6:30-16:30。(2)桑天牛交配行为观察结果显示,下颚须、下唇须及外生殖器在桑天牛配偶识别中发挥主要作用,尤其是雌雄成虫外生殖器的接触是桑天牛交配行为成功的关键,表明桑天牛外生殖器中存在感器及虫体性信息素组分。(3)桑天牛对5种虫体气味物质的EAG反应结果显示,雌虫主要对Z-9-二十三烯、二十七烷和二十九烷的EAG反应强烈,最佳反应浓度均为0.01mg/ml;雄虫则主要对二十九烷、Z-9-二十三烯反应强烈,最佳反应浓度分别为0.1 mg/ml和0.001 mg/ml。其中二十七烷仅对雌虫具有强烈EAG反应。雌虫对二十七烷、1-二十二烯和Z-9-二十三烯的灵敏度要远高于雄虫,对二十九烷的灵敏度低于雄虫。(4)通过扫描电镜观察,在桑天牛雌雄成虫外生殖器上共发现感器5类10种,分别为毛形感器、刺形感器、锥形感器、芽形感器、鳞形感器和钟形感器。其中,毛形感器存在2种亚型,刺形感器存在4种亚型,且刺形感器Ⅲ型和钟形感器为雄成虫特有,刺形感器Ⅳ型、锥形感器和芽形感器为雌成虫特有。(5)对桑天牛成虫雌雄外生殖器转录组数据进行分析,共获得69406个Unigenes基因,平均长度1813 bp,分别有41983、30963、30099、29678、9480、5341个Unigenes基因在Nr,KEGG,Swiss-prot,GO,COG,Pfam六大数据库中被成功注释。(6)利用生物信息学软件分析桑天牛外生殖器转录组数据,共鉴定气味结合蛋白基因20个,含性信息素结合蛋白基因6个;化学感受蛋白基因4个;气味受体基因8个。(7)桑天牛性信息素结合蛋白基因的RT-qPCR结果显示,Ager PBP1和Ager PBP6在桑天牛雌雄成虫触角中高表达,Ager PBP2在雄虫触角、雌雄虫下唇须及下颚须中均较高表达,Ager PBP5主要高表达于雌虫触角,Ager PBP3、Ager PBP4在雄性下颚须和外生殖器中特异性表达。这一结果成功筛选出了桑天牛交配行为中可能发挥作用的关键嗅觉蛋白基因,为后期基因功能研究奠定了重要基础。
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