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海洋微生物能够产生抗肿瘤活性代谢产物,但国内外对海带内生菌代谢产物的研究报道却很少,因此有必要对其进行深入研究,本文以海带内生菌DNN7粗蛋白为研究对象,采用DEAE 52阴离子交换层析和Sephadex G-100分子筛凝胶层析进行分离纯化,对得到的组分进行蛋白浓度测定、SDS-PAG电泳、MALDI-TOF/TOF-MS质谱分析及抗肿瘤活性的检测,主要研究结果如下:1、经DEAE 52阴离子交换层析分离得到4个峰,分别为P1、P2、P3和P4,其中,P3对5种指示菌的抑菌活性最好,其他峰的抑菌活性较弱;P1只得到两条电泳条带,其他3个峰的条带比较多且复杂;对所有条带进行MALDI-TOF/TOF-MS质谱分析,其中P1的第二条带(约为33 k Da)在NCBI数据库中比对结果为蛋白酶E,P2的第一条带(约为53 k Da)比对为与尾卷尺蛋白质gp18,P3的第二条带(约为70 k Da)比对为过氧化氢酶。2、对P3进行Sephadex G-100分子筛凝胶层析分离得到3个峰,分别为P3-1、P3-2和P3-3;P3-3对5种指示菌具有较好的抑菌活性;P3-1得到4条带,P3-2得到3条带,P3-3只有单一条带,但是小于蛋白Maker的最小分子量10 k Da,大约为8 k Da左右。通过MALDI-TOF/TOF-MS质谱鉴定其精确分析分子量可能约为8826.8 Da,P3-3条带酶解后经质谱鉴定在NCBI数据库中未能比对上已知蛋白,P3-3可能为新蛋白。3、P3在10-300μg/m L浓度范围内,对MDA-MB-231人乳腺癌细胞的抑制率呈现先升高后降低的趋势,浓度为200μg/m L时,抑制效果最佳,抑制率能达50.95%;P3-1、P3-2及P3-3对MDA-MB-231细胞的均有抑制作用,抑制率分别为46.24%、34.28%和54.40%;P3-3对RL95人子宫颈癌细胞和HCC97H肝癌细胞同样具有抑制作用,抑制率分别为25.36%和32.65%。