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大肠杆菌是普遍存在自然界中的细菌,一般情况下不致病,但一些血清型、毒力因子等具有致病性,能引起人和动物共同感染,是人畜共患病原菌。由致病性大肠杆菌导致的仔猪黄痢、仔猪白痢、仔猪水肿,发病率和死亡率高,给养猪业带来巨大的经济损失。由于抗生素滥用引发的耐药性问题,更是使当前生猪大肠杆菌病的防控愈发的困难。2018年2月份-8月份,闽西地区出现不同规模化猪场发生不明原因引起的仔猪腹泻率明显增高的现象,给养殖户造成了严重的经济损失。为确定造成本次疫情的病原菌,本研究采集发病仔猪的组织样品进行了大肠杆菌的分离鉴定、种系发育分析、毒力基因检测及敏感药物筛选等研究,以期为该地区生猪大肠杆菌病的防控提供科学依据。具体研究工作如下:1.猪源大肠杆菌的分离鉴定及种系发育分群:通过细菌培养及染色、生化试验、16S rRNA序列分析等方法,本研究自采集的62份腹泻仔猪组织样品中共分离、鉴定出44株大肠杆菌,分离率为70.97%;种系发育分群结果显示,44株猪源大肠杆菌中有26株为A群、12株为B1群、4株为B2群、2株为D群,表明本研究分离的44株大肠杆菌主要以共生群为主,占总分离菌数的86.36%(38/44)。2.猪源大肠杆菌相关毒力基因检测:为了解44株大肠杆菌毒力基因携带情况,分别对常见猪源致病性大肠杆菌相关毒力基因和常见禽源致病性大肠杆菌相关毒力基因进行了PCR检测。结果显示,在12种猪源致病性大肠杆菌相关毒力基因中,仅检测出EAST1、LT、STb、STa和F4 5个毒力基因,检测率分别为43.18%、25.00%、22.72%、13.63%、11.36%;对禽源致病性大肠杆菌相关毒力基因检测结果显示,在13种相关毒力基因中,44株大肠杆菌共检测出luxs、ompA、irp2、iroC、iucD、cvaC、fyuA、tsh和iss 9个毒力基因,检测率分别为90.91%、75.00%、34.10%、27.27%、25%、13.63%、9.09%、9.09%、4.55%。3.猪源大肠杆菌耐药性分析:为了解44株分离菌株耐药情况,选用12种临床常用抗菌药物进行药敏试验,结果显示44株分离菌对氟苯尼考、头孢噻呋、磺胺间甲氧嘧啶、氨苄西林、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、多西环素、恩诺沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素、头孢噻肟、阿米卡星耐药率分别为93.12%、93.12%、93.12%、90.91%、84.09%、75.00%、75.00%、68.18%、61.36%、59.09%、40.91%和20.45%,表明44株大肠杆菌对所选抗菌药物耐药情况严重。对分离菌进行氯霉素类相关耐药基因floR和β-内酰胺酶类4种相关耐药基因TEM、CTX、OXA、SHV进行检测,结果检出率分别为81.82%、70.45%、45.45%、45.45%和0%,进一步分析发现44株分离菌氯霉素类和β-内酰胺酶类的耐药表型和耐药基因检测结果的符合率分别为97.22%和93.18%,表明分离菌表现出的耐药机制可能是因为相关耐药基因的存在。4.猪源大肠杆菌致病性研究:为了解A、B1群分离菌株的致病,结合上述毒力基因检测及耐药性分析结果,分别选取A群3株分离菌(MX-15、MX-19、MX-42)和B1群3株分离菌(MX-6、MX-10、MX-30)进行了小鼠致病性试验。结果显示,与对照组相比,试验小鼠接种A群分离菌后,表现出被毛粗乱、精神沉郁、眼睛有明显的分泌物等症状,在26 h内全部死亡,病理剖检及组织病理观察结果显示,攻毒组小鼠的肝、脾、肺、肠道等多个组织器官均表现出较为严重的病理损伤;而试验小鼠在接种B1群分离菌后,表现出与A群分离菌攻毒后相类似的临床症状与病理变化,所有试验小鼠接种后34 h内全部死亡。上述结果表明A群和B1群的分离菌株对试验小鼠具有明显的致病性,均能造成致死性感染,提示我们在临床上要引起重视。综上所述,本研究共分离鉴定出44株大肠杆菌,且主要为共生型(A群、B1群)大肠杆菌。进一步研究发现,所分离的38株共生型大肠杆菌普遍携带有多个毒力相关基因,且多重耐药情况严重。对共生型(A群、B1群)大肠杆菌的致病性试验结果显示,它们对试验小鼠具有明显的致病性,能引起致死性感染。因此在临床上对共生群大肠杆菌要引起重视。