青藤碱对人胃癌SGC-7901细胞EMT的作用机制研究

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目的:研究青藤碱(SIN)对人胃癌细胞SGC-7901增殖、侵袭以及转移相关基因和蛋白表达的影响。方法:1细胞存活率检测:用不同浓度SIN处理人胃癌SGC-7901细胞后,用WST-1法检测不同处理时间的细胞存活率。2 MMP表达:用不同浓度SIN处理人胃癌SGC-7901细胞,ELISA检测MMP-2和MMP-9在细胞培养基中的含量变化。3 RT-PCR检测不同浓度SIN对人胃癌SGC-7901细胞相关EMT基因mRNA表达水平的影响。4 Western blotting检测不同浓度SIN对人胃癌SGC-7901细胞相EMT蛋白表达水平的影响。5 Western blotting检测不同浓度SIN对人胃癌SGC-7901细胞核内NFκB p65蛋白表达水平的影响。结果:1采用不同浓度的SIN处理人胃癌SGC-7901细胞,检测结果表明:处理24 h后,1 mmol/L、2 mmol/L、2.5 mmol/L和3mmol/L处理组的细胞存活率显著低于对照组(P<0.05)。处理48 h后,0.5 mmol/L、1 mmol/L、2 mmol/L、2.5 mmol/L以及3 mmol/L处理组的细胞存活率显著低于对照组(P<0.05),且对青藤碱具有时间和剂量依赖性。2 SIN处理后,可降低人胃癌SGC-7901细胞培养基MMPs的含量。各SIN处理组培养基中MMP-2含量显著低于对照组(P<0.05),1 mmol/L和2 mmol/L处理组的MMP-9含量降低(P<0.05)。3 RT-PCR和Western Blotting结果表明:随SIN浓度升高,各处理组人胃癌SGC-7901细胞中MMP-2 m RNA、蛋白表达以及MMP-9 mRNA表达丰度均显著降低(P<0.05)。其中0.5mmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L三个处理组MMP-9蛋白表达也显著降低(P<0.05);与对照组相比,0.5mmol/L、1mmol/L和2 mmol/L处理组Snail基因和蛋白表达显著降低(P<0.05);与对照组相比,0.5 mmol/L、1mmol/L和2 mmol/L处理组E-cadherin基因和蛋白表达显著升高(P<0.05)。4 Western Blotting结果发现,随着SIN浓度的升高,SGC-7901细胞核中NFκB p65蛋白表达呈现降低趋势。与对照组相比,与0.5 mmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L处理组均显著降低(P<0.05)。结论:1 SIN能抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖,且具有时间和浓度依赖性;2 SIN对胃癌细胞SGC-7901中EMT相关蛋白表达和NFκB p65的核转位具有一定的调节作用;3 NFκB p65可能通过核转位来参与SN对SGC-7901的EMT调控作用。
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