【摘 要】
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目的:探讨TTP(tritetraprolin)过表达对肺腺癌细胞生物学的影响,探讨可能的作用机制。方法:构建带有四环素可调控(tetracycline-on,Tet-on)的TTP基因表达系统,利用慢病毒感染
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目的:探讨TTP(tritetraprolin)过表达对肺腺癌细胞生物学的影响,探讨可能的作用机制。方法:构建带有四环素可调控(tetracycline-on,Tet-on)的TTP基因表达系统,利用慢病毒感染的方法转染肺腺癌H1975及1299细胞,并在强力霉素(doxycycline,Dox)的诱导下稳定表达TTP。用实时荧光定量PCR(QPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定TTP受Dox调控表达的效果。分别采用CCK8法、Transwell、平板克隆形成实验、流式细胞术检测TTP过表达后对细胞增殖、迁移、集落形成能力、凋亡和细胞周期的影响。蛋白质印迹法检测TTP过表达对凋亡和自噬相关基因表达的影响。透射电镜检测自噬小体的变化。结果:成功构建受Dox诱导调控的TTP过表达肺腺癌细胞模型。与TTP低表达组比较,Dox诱导TTP过表达组明显抑制H1975、H1299细胞增殖、迁移能力(H1975:P<0.01,H1299:P<0.001)及集落形成能力(P值均<0.0001),且使H1975细胞周期被阻滞在S期(P<0.01),但TTP过表达不影响肺腺癌细胞凋亡。进一步研究发现Dox诱导的TTP过表达组的自噬相关基因Beclin1(H1975:P<0.001,H1299:P<0.01)、LC3II/LC3Ⅰ(H1975:P<0.01,H1299:P<0.001)蛋白表达水平均低于TTP低表达组,p62蛋白表达水平无明显变化。透射电镜检测发现TTP过表达后自噬体数量减少。结论:TTP过表达显著抑制肺腺癌细胞增殖、迁移、集落形成能力,从而显著抑制肺腺癌的发生发展。TTP过表达使细胞周期被阻滞在S期,但TTP过表达不通过细胞凋亡途径影响肺腺癌细胞增殖和生长,其可能的分子机制是可能通过抑制细胞自噬而抑制肺腺癌细胞的增殖和生长。
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