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实验目的：鉴定CD133+-HepG2肝癌细胞的干细胞特性，然后通过131I标记CD133单克隆抗体，研究其在人HepG2肝癌裸鼠模型体内生物分布及其在体内肿瘤中的放射免疫靶向性。第一部分CD133+-HepG2细胞的分选及其干细胞特性的鉴定实验方法：免疫磁珠法分选人肝癌CD133+-HepG2细胞，FCM法检测分选前后CD133表达率，对分选得到的CD133+-HepG2肝癌细胞进行体外成球、克隆形成以及BALB/c小鼠体内成瘤实验以鉴定其干细胞特性，并取CD133+-HepG2细胞皮下移植瘤组织进行HE染色，观察肿瘤组织结构。实验结果：利用免疫磁珠法成功的得到CD133+-HepG2及CD133--HepG2细胞，FCM检测HepG2细胞分选前后CD133表达率分别为（3.69±1.52）%和（93.58±3.74）%；CD133+和CD133-细胞无血清培养观察体外成球能力，结果显示随着时间的延长，CD133+细胞抱团生长，且球体数量增多、体积增大，而CD133-细胞则不能，且细胞形态出现异常，细胞逐渐裂解。而在克隆形成实验中，相同条件下CD133+细胞的克隆集落数明显高于CD133－细胞，二者差异有统计学意义（P<0.01)，另外显微镜下观察CD133+细胞形成的克隆球对比CD133-细胞形成的克隆球明显较大。体内实验结果显示，1×103个CD133+细胞组于5周内有一只BALB/c小鼠体内形成皮下移植瘤，5×103个CD133+细胞组中有2只形成皮下移植瘤，1×104个CD133+细胞组中四只均能形成皮下移植瘤，而相同条件下1×104CD133-细胞也不能成瘤，HE染色显示由CD133+细胞形成的皮下移植瘤在显微镜下组织细胞排列紧密，细胞核清晰可见。实验结论：上述实验结果显示免疫磁珠分选得到的CD133+-HepG2细胞对比CD133--HepG2细胞具有更强的体外成球、克隆形成以及体内成瘤能力，是具有肿瘤干细胞特性的肝癌细胞亚群。第二部分131I标记CD133单克隆抗体在体内的放射免疫靶向研究实验方法：采用氯胺T法标记131I和CD133单克隆抗体（131I-CD133抗体），纸层析法测定标记物的标记率、放化纯度和其在人血清中的稳定性，以及采用细胞结合实验测定其免疫活性；建立HepG2肝癌裸鼠模型，将建立好的肝癌裸鼠模型随机分为四个时间（2,12,24和48h），每个时间组5只，将每只肝癌裸鼠尾静脉注射131I-CD133抗体约7.4MBq，计算各时间组各组织器官每克组织百分注射剂量率(％ID／g)；采用同型单克隆抗体IgG作为对照，方法相同，比较两种标记物在HepG2肝癌裸鼠模型中24h时各组织生物分布及肿瘤/非肿瘤组织（T/NT）比值。实验结果：纸层析法测得131I-CD133抗体的标记率为（86.95±1.16）%,放化纯度为98.07%；与血清孵育48h后，131I-CD133抗体的放化纯度仍为（89.63±0.64）%；131I-CD133抗体与CD133＋细胞的结合率随着细胞浓度的递增而增加，最大结合率为（69.3±0.69）%，CD133－细胞作为对照与标记物的结合能力明显低于CD133＋细胞（P＜0.01)。131I-CD133抗体在HepG2肝癌裸鼠模型中2、12、24和48h肿瘤组织的%ID/g分别为（2.52±0.13）%、（1.09±0.08）%、（0.80±0.10）%、（0.60±0.10）%,与对照组131I-IgG在24h时的肿瘤放射性摄取及各组织T/NT对比，131I-CD133抗体组明显高于对照组131I-IgG，差异有统计学意义（P<0.05)；实验结论：本实验成功的制备了具有较好稳定性和免疫活性的131I-CD133抗体，其对比对照组131I-IgG在HepG2肝癌裸鼠模型中能更有效的浓聚于肿瘤，能够反应CD133表达情况，为体内靶向CD133+肿瘤干细胞治疗及显像提供了实验基础，CD133将有可能成为LCSCs及肝癌治疗的有效靶点。这些结果显示靶向CSCs的治疗可以通过放射性核素标记CSCs表面标志物的方法来实现。