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随着石化燃料由短缺变为枯竭,能源问题成为人类面临的共同问题,新型、洁净、可再生能源开发关系到经济的可持续发展乃至人类的生存。研究和利用以白蚁为代表的各类自然高效生物转化系统(丰富的微生物区系),为攻克生物质高效经济转化的国际性难题开辟了一个可能的新途径。本文以白蚁(扩头蔡白蚁Tsaitermes ampliceps和商城奇象白蚁Mironasutitermes shangchengensis)和蝗虫(东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis和短额负蝗Atractomorphasinensis等5种蝗虫)为研究对象,研究它们的肠道共生菌的群落结构,为阐明它们肠道降解木质纤维素的机制提供资料。
(1)通过构建扩头蔡白蚁肠道共生菌的16S rDNA文库,并用变性梯度凝胶电泳(Denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)对文库进行分型筛选后测序。PCR扩增得到的16S rDNA基因代表了白蚁肠道内的15种系统发育型(phylotype),大多属于螺旋体Spirochaetes、梭菌Clostridia和鞭毛虫纲的焰滴虫共生菌Endosymbiont of Pyrsonymphavertens,部分属于α-变形菌Alpha proteobacteria和δ-变形菌Delta proteobacteria,还有少量芽孢杆菌Bacilli。其中螺旋体为优势群体,丰度达到28.07%;其次为梭菌和焰滴虫共生菌,丰度分别为24.34%和23.28%;芽孢杆菌最少,丰度仅有2.12%。
(2)通过PCR-DGGE以及割胶回收测序分析得到商城奇象白蚁肠道内的共生细菌共有16种系统发育型,大多属于β、δ和γ变形菌纲,相对丰度分别为23.61%、17.16%和12.63%;其次为梭菌纲Clostridia和纤维杆菌纲Fibrobacteres,相对丰度分别为9.94和9.62%;部分属于螺旋体纲Spirochaetes、芽孢杆菌纲Bacilli和拟杆菌纲Bacteroidetes,相对丰度分别为7.68%、7.37%和6.24%;还有少量的放线菌纲Actinobacteria,相对丰度仅5.73%。
(3)用PCR-DGGE研究了5种蝗虫短额负蝗、中华蚱蜢Acrida cinerea、东亚飞蝗、云斑车蝗Gastrimargus marmoratus Thunberg、中华稻蝗Oxya chinensis的肠道共生菌多样性,其中中华稻蝗的共生菌种类最多,DGGE图谱显示有20条条带;东亚飞蝗和短额负蝗次之,分别有13和14条;中华蚱蜢有11条;云斑车蝗最少,有5条。并以东亚飞蝗和短额负蝗为例进行了DGGE条带割胶回收测序分析,结果显示东亚飞蝗肠道内的共生细菌共有7种系统发育型,其中克雷伯氏菌属Klebsiella pneumoniae为最优势的群体,相对丰度达到19.74%;其次蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus和木糖葡萄球菌Staphylococcus分别为17.17%和14.64%;再次为芽胞杆菌属Bacillus和节杆菌属Arthrobacter,相对丰度分别为13.91%和12.03%;而绿脓杆菌Pseudomonas和阴沟肠杆菌Enterobacter cloacae则相对较少相对丰度分别为11.61%和10.90%。短额负蝗肠道内共生细菌共有5种系统发育型,其中α-变形菌纲Alphaproteobacteria为最优势的群体,相对丰度达到29.04%,其次为放线菌纲和芽胞杆菌纲,相对丰度分别为19.72%和19.95%;螺旋体纲和链球菌属Streptococcus较少,相对丰度分别为17.81%和13.48%。