罗布麻叶多糖提取及其生物活性的研究

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罗布麻(Apocynum venetum Linn),为夹竹桃科罗布麻属植物,适应性极强,广布于我国北方盐碱荒漠地区,尤其在我省黄河三角洲盐碱滩涂其资源异常丰富。罗布麻叶,作为我国传统中药,具有平肝安神、清热利水等功效,用于治疗肝阳眩晕、心悸失眠、浮肿尿少等症。我国已经生产出罗布麻单方、复方片剂及罗布麻冲剂等药剂。在北美和东南亚国家,罗布麻茶因其具有降血压、降血脂、降血糖以及镇静催眠等功效而备受重视,已作为保健品上市。罗布麻叶含有多种生物活性成分,较多的研究认为其降血压等功效与其黄酮类成分有关,但其降血糖等功效的活性成分尚未明确。近年来,对植物多糖的研究越来越多,大量的研究证实植物多糖的药理作用十分广泛,有提高免疫力、清除自由基、抗肿瘤、抗感染、降血脂、降血糖等作用,目前关于植物多糖的药理研究中尤以降血糖和降血脂的研究较多。国内众多研究认为,植物多糖如枸杞多糖、玉米须多糖、南瓜多糖等十几种多糖给糖尿病动物模型灌胃能降低血糖,提高胰岛素水平。然而,植物多糖分子量大,结构复杂,机体缺乏相应的消化酶,这类多糖不能被分解、吸收,不可能直接改善胰岛功能,不可能直接在体内起到改善糖代谢和免疫功能来达到降低血糖的作用,已有研究表明植物多糖提取过程中采用适当的处理方法可以得到适宜分子量的多糖,增强其降血糖和降血脂的功效。所以,本研究拟对罗布麻叶多糖采取不同的提取方法,比较其体外活性,验证其体内降血糖功效,为罗布麻叶多糖在医药保健领域方面的应用提供科学依据。本实验采用酸(HCl)、碱(NaOH)和蒸馏水提取罗布麻叶多糖,研究了不同提取溶剂和提取温度对罗布麻叶多糖产率的影响。利用苯酚-硫酸比色法、Bradford法、福林酚法及HPLC法等测定了多糖的化学成分。利用DPPH清除自由基、ABTS清除自由基及还原能力测定了其抗氧化活性。测定了其对α-葡萄糖苷酶和脂肪酶的抑制活性。采用70%甲醇洗涤和酸水解对碱提罗布麻叶多糖进行了纯化。基于体外生物活性的基础上,本实验进一步研究了水提取和碱提取罗布麻叶多糖对II型糖尿病小鼠模型的降血糖和降血脂作用。采用高脂饮食和注射链脲佐菌素(STZ)联合诱导II型糖尿病模型,通过灌胃小鼠罗布麻叶多糖4周后,分析不同组小鼠的生化指标和肠道菌群变化。结果显示,碱提罗布麻叶多糖的产率最高,达到21.32%,而且碱提罗布麻叶多糖的体外抗氧化活性和对α-葡萄糖苷酶和脂肪酶的抑制活性最强。但是,碱提罗布麻叶多糖中含有少量的多酚和蛋白成分,而多酚具有较高的抗氧化活性和酶抑制活性。通过对碱提罗布麻叶多糖纯化后,70%的甲醇洗涤和酸水解能有效地降低多酚和蛋白含量,而且纯化后的多糖对DPPH自由基的清除能力略有降低,对ABTS自由基的清除能力和还原能力明显提高,尤其是酸水解后的多糖体现的更明显。在酶抑制活性方面,70%甲醇洗涤后的多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制活性较好,对脂肪酶的抑制活性没有显著变化,而酸水解后的多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制活性没有显著变化,但对脂肪酶的抑制活性有所降低。这表明可能α-葡萄糖苷酶的抑制活性主要来源于多糖组分,而脂肪酶的抑制活性则是多糖和多酚协同作用的结果。小鼠实验结果显示,灌胃碱提罗布麻叶多糖的小鼠,相比于糖尿病组小鼠,其空腹血糖、血清胰岛素、糖化血清蛋白水平,以及包括总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、胆固醇和游离脂肪酸在内的血脂谱都有了明显的改善。此外,碱提罗布麻叶多糖还可以改善糖尿病小鼠的抗氧化能力和肝糖原合成,水提和碱提罗布麻叶多糖均能逆转II型糖尿病小鼠引起的肠道微生物群失调。综上,罗布麻叶多糖具有较高的抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶和脂肪酶抑制活性,碱提罗布麻叶多糖对II型糖尿病小鼠有明显的降糖作用,对糖尿病小鼠肠道菌群也有调节作用。本研究将为罗布麻叶多糖作为治疗II型糖尿病的功能性营养品的开发提供了新的思路。
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