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研究目的:生发中心(Germinal center,GC)辅助T细胞(Tfh或GC T)支持GC B细胞活化、存活以及功能成熟的分子机制还不是很清楚。迄今为止,GC B细胞上CD40接受Tfh细胞上CD40L的辅助信号是被研究最多的Tfh细胞提供的辅助信号。而GC B细胞内发生的许多现象又无法完全通过CD40的活化来解释。GC内T-B相互作用有众多的共刺激分子信号通路的参与,这些信号通路在GC内对B细胞的辅助作用还需要进一步的研究。我们想通过我们的研究,找出GC内对B细胞存活及功能成熟的新的分子机制,使我们对GC内的分子信号通路有更深入的了解。研究方法:分选GC B细胞以及GC T细胞,然后体外共培养,培养体系中加入已经报道的共刺激分子通路的封闭性抗体,先以GC B细胞的存活为指标,通过体外的筛选实验找出在GC阶段,哪些信号通路对GC B细胞存活的辅助起关键作用。然后再通过体外刺激,及基因敲除技术找出起关键作用的共刺激分子通路,及这些共刺激分子通路通过激活哪些信号通路来辅助GC B细胞的存活及功能成熟。最后通过基因敲除和骨髓重建等技术来证明相关的共刺激分子通路在体内的作用。成果和结论:我们首先通过体外的筛选实验证明在参与T-B互作的众多共刺激分子通路中,ICOS-ICOSL对GC B细胞的促存活作用最为关键。进一步的研究表明GC T细胞提供给GC B细胞的存活和功能成熟辅助信号是通过ICOS-ICOSL信号通路并且可通过ICOSL介导的反向信号来实现对GC B细胞存活的促进作用。然而,我们进一步发现GC B上CD40介导的信号对GC B的存活似乎并没有明显的作用。用ICOS重组蛋白静脉注射ICOS基因缺陷的小鼠能够部分恢复GC的形成和抗体产生。多种ICOSL突变小鼠,包括整个B细胞ICOSL完全缺失、GC B细胞ICOSL缺失及B细胞ICOSL胞内段缺失小鼠,都表现出体液免疫缺陷及GC形成受损。我们进一步发现GC B细胞上ICOSL介导的反向信号通过激活经典的NF-κB信号通路来上调跟GC B细胞存活和功能成熟相关的蛋白的表达,如MCL-1、c-MYC、FOXO1及AID等。因此,我们的实验数据表明ICOSL-ICOS信号通路在GC阶段起着双向的作用。