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丙型肝炎病毒(HCV)是严重危害人类健康的病原体。对于HCV,至今既无可靠的疫苗,也无有效的药物,丙型肝炎的防治是一个世界性难题。 HCV的核心蛋白(C)、包膜糖蛋白1(E1)和包膜糖蛋白2(E2)是构成病毒颗粒的结构蛋白。HCV结构蛋白还在病毒的进入细胞,引起细胞的免疫应答和致病机制中起着重要作用。对HCV结构蛋白的研究对于了解HCV的生物学和免疫学特性,以及发展有效的HCV基因工程疫苗和敏感的诊断试剂具有重要意义。 本研究分为两个部分。第一部分用原核表达系统对HCV的核心蛋白的不同区段进行非融合表达,并研究其抗原性和诱导机体产生抗体的能力等免疫学特性。 第二部分用真核表达系统表达HCV的所有结构蛋白:C、E1和E2。研究表达蛋白的相互作用和寡聚化装配情况。从免疫、生化学和形态学角度探讨在昆虫细胞内HCV样颗粒的形成,并对其进行了鉴定。 第一部分:HCV核心蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫学特性研究 用DNA重组技术在两种表达质粒(pQE30和pTrcHisA),四种宿主菌(DH5a,TOP10,BL21和M15)中表达HCV全长及羧基端部分缺失的核心蛋白(aa1-191,aa1-154和aa1-69),表达蛋白经SDS-PAGE检测,免疫印迹分析,亲和层析法纯化后免疫BALB/C小鼠,ELISA法检测免疫小鼠血清中抗HCV抗体水平。结果表明,HCV核心蛋白C154,C191在pQE30/M15中获得了表达,表达量分别占菌体总蛋白的18.2%和9.3%。免疫印迹分析的结果显示在C154和C191相应位置处出现免疫印迹条带。表达蛋白得到了纯化。ELISA结果显示C154和C191诱导小鼠产生了抗HCV抗体。研究结果说明表达的重组蛋白具有抗原特异性和免疫原性。“截断”型HCV核心蛋白的抗原性和免疫原性并未因羧端的部分缺失而减弱。 第二部分:HCV结构蛋白在昆虫细胞中表达形成病毒样颗粒的研究 利用PCR技术扩增得到5′NCR-CE1E2、CE1E2、C、E1和E2等HCV结构蛋白