【摘 要】
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目的:探讨低极性人参皂苷(ALK)对人髓系白血病K562细胞株增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT法和半固体琼脂集落培养法,检测ALK对K562细胞增殖的影响,及其时间-剂量效应关系;Ann
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目的:探讨低极性人参皂苷(ALK)对人髓系白血病K562细胞株增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT法和半固体琼脂集落培养法,检测ALK对K562细胞增殖的影响,及其时间-剂量效应关系;Annexin V/PI双标记法检测细胞凋亡率;采用瑞氏-吉姆萨染色,观察细胞形态学变化;应用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡形成的DNA降解梯形条带;蛋白印迹(Western blot)法观察K562细胞凋亡相关蛋白 Bcl-2、caspase-3、caspase-9、survivin、细胞色素 C(Cyt C)蛋白表达水平的变化;采用免疫细胞化学法观察CytC、Bcl-2蛋白的表达。结果:MTT法显示ALK在一定浓度下能够明显抑制K562细胞增殖,并呈时间-剂量依赖性,100mg/L药物48h与72h抑制率分别达到(38.29±2.15)%和(57.46土 1.06)%(P<0.05);半固体琼脂集落培养法显示1OOmg/L药物抑制率(61.00±1.00)%(P<0.05);流式细胞术显示,经不同浓度ALK处理48h后,75、100mg/L 药物 Annexin V 阳性率分别为(9.07±2.08)%、(15.81±1.97)%,与对照组(2.52±0.10)%比较有统计学意义(P<0.05);瑞氏-吉姆萨染色显示,ALK作用K562细胞72h后,浓度≥50mg/L时可见染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的细胞凋亡形态学改变;DNA琼脂糖凝胶电泳分析显示药物1OOmg/L时出现典型的凋亡特异性DNA降解梯形条带;不同浓度ALK作用K562细胞72h后,上调Cyt C、actived caspase-9蛋白的表达,下调Bcl-2、survivin、procaspase-9、caspase-3酶原蛋白的表达;免疫细胞化学显示,CytC蛋白的表达水平随药物浓度增加而显著增高,而Bcl-2蛋白的表达则明显降低。结论:ALK能够抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡。Bcl-2、caspase-3、caspase-9、survivin、Cyt C基因可能参与了 ALK抑制K562细胞增殖和诱导凋亡的过程。
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