Ghrelin是含有为保持活性所必需辛酰基化部位的28个氨基酸多肽,最早在人和鼠的胃内被发现并被认为是一种生长激素释放激素受体(growth hormonesecretagogue receptor,GHSR)的天然配体。研究发现,Ghrelin与其受体结合后除了能促进生长激素(growth hormone,GH)的释放外,还能调节胃肠运动、能量代谢平衡,并在人类多种疾病或病理状态和动物的促生长中发挥重要的作用。因此,Ghrelin的研究是目前人们所关注的一个热点。本研究采用RT-PCR从猪胃底腺克隆Ghrelin基因,在Ghrelin基因两端分别引入NheⅠ和XhoⅠ酶切位点构建pcDNA3.1(+)-Ghrelin真核表达载体。以壳聚糖为载体,采用复凝聚法制备了CS-pcDNA3.1(+)-Ghrelin纳米粒。CS-pcDNA3.1(+)-Ghrelin纳米粒的检测结果表明:纳米粒平均粒径为180.4±13.5nm,包封率为95±1.27％,载基因纳米粒中DNA的含量为37±2.0％。将CS-pcDNA3.1(+)-Ghrelin纳米粒注射断乳小鼠后肢肌肉(剂量为0.5mg质粒/kg BW),研究其对小鼠生长的影响。
　　结果表明,0~5d注射裸质粒组小鼠累积增重最显著(载质粒纳米粒组4.41±0.23g、裸质粒组5.42±0.61g、生理盐水组3.93±0.96g);0~25d载质粒纳米粒组的累积增重分别比裸质粒组、生理盐水组高12.0％、25.4％(P<0.05);检测30d小鼠血液GH浓度,结果表明,载质粒纳米粒组GH浓度(2.36±0.32ng/mL)均明显高于生理盐水组(1.75±0.23ng/mL)和裸质粒组(1.78±0.26ng/mL),而裸质粒纳米粒组GH浓度与生理盐水组相比略高。本研究表明,Ghrelin基因对小鼠有很好的促生长作用,而壳聚糖介导的CS-pcDNA3.1(+)-Ghrelin纳米粒能够更加有效、持久的促进小鼠生长,这种作用主要是通过提高血清GH浓度实现的。本研究为Ghrelin纳米缓释质粒的临床应用奠定了理论和试验基础。