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脑胶质瘤是颅内最常见、最具侵袭性的原发性肿瘤,大多为恶性、生长迅速,外科手术不能完全切除,患者的生存期短、死亡率高,目前没有较好的治疗方法。阐述胶质瘤发生、发展的分子机制,寻找和鉴定治疗神经胶质瘤生成通路中关键信号及调控因子,仍是当前神经胶质瘤临床和基础研究领域最重要的课题之一。MicroRNA(miRNA)是一类由21—25个核苷酸构成的非编码小分子单链RNA,具有转录后调节功能,对真核生物基因表达调控起重要作用。通过作用于相应的靶基因,miRNA能参与细胞的增殖、分化、凋亡、代谢、发育、肿瘤转移等多种生物学过程。最新研究表明,miR-196a在多种肿瘤组织或细胞系中表达异常。我们前期的工作基础表明,miR-196a表达与胶质瘤发生发展及预后相关,miR-196a有两条成熟序列：5’-uagguaguuucauguuguuggg-3’(miR-196a),5’-cggcaacaagaaacugucugag-3’(miR-196a*).目前,已知的miRNA-196a靶基因有HOXC8,HMGA2,ANXA1和p27kip1四个。在胶质瘤细胞中,还未进行miRNA-196a靶基因寻找及鉴定实验,本实验通过在胶质瘤细胞中寻找其靶基因,旨在说明miRNA-196a在胶质瘤发生和发展的信号通路中的重要作用,为胶质瘤的临床治疗提供新的研究方向。本实验中,我们选用高表达miR-196a的脑胶质瘤细胞系U251作为实验材料。使用人工合成的miR-196a mimics/miR-196a inhibitor转染进入细胞,模拟miR-196a在细胞中的高表达和低表达,进而引起下游基因和蛋白质的表达量受到影响。实验分四组进行(A：转染miR-196a*mimics:B:转染miR-196a mimics:C：转染miR-196a inbibitor；D:空白对照)通过高通量的蛋白组学分析,对各实验组进行比较,并结合生物信息学信息,找到miR-196a/miR-196a*对应的靶基因,挑选最可能的基因进行鉴定。本实验中,通过高通量的蛋白组学分析,3组实验组与对照组相比,找出848个差异蛋白,通过各组间差异蛋白分析,结合生物信息学分析,最终确定：通过与对照组比较,miR-196a*存在5个潜在的靶基因(EIF43C,HDGF, MTDH,SLC4A7,ANXA2), miR-196a存在8个潜在的靶基因(ACLY,MTDH, SMARCA1, YWHAB, MARCKS, ANXA1, API5, CALD1).考虑到多个ANXA基因家族成员是潜在的靶基因,我们选择ANXA1, ANXA2分别在mRNA及蛋白水平进行验证。并确定在胶质瘤细胞中,ANXA1是miR-196a潜在的靶基因,而ANXA2是miR-196a*靶基因的可能性极大。这是首次发现ANXA2与miR-196a*的关联性,两者之间的确切关系有待进一步实验验证。EGFR(Epidermal growth factor receptor)高表达是胶质瘤细胞基本特征之一,可通过影响自身参与的生物学信号通路,例如是PI3K/AKI信号通路,对胶质瘤的发生发展产生影响,ANXA1是蛋白EGFR的酶作用物,可能影响EGFR表达,据此,我们假设一条miR-196a主导的影响胶质瘤发生机制的通路,即’miR-196a-负调控靶基因ANXA1-EGFR-PI3K/AKI信号通路”,但其最终成立还需更具说服力的实验验证。