【摘 要】
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早期诊断对于疾病诊疗具有重要意义。早预防、早发现、早治疗是降低疾病发病率,改善预后,提高患者生存率的关键。与目前临床上广泛应用的组织活检相比,液体活检由于其非侵入性、高准确性和实时监测等优势受到越来越多的关注。蛋白生物标志物是液体活检中最常应用的检测手段,但传统的蛋白质检测方法灵敏度不足,对于一些低丰度蛋白的检测具有较大的局限性。单分子阵列技术(Simoa)是一种超灵敏的基于磁珠的数字化酶联免疫吸
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早期诊断对于疾病诊疗具有重要意义。早预防、早发现、早治疗是降低疾病发病率,改善预后,提高患者生存率的关键。与目前临床上广泛应用的组织活检相比,液体活检由于其非侵入性、高准确性和实时监测等优势受到越来越多的关注。蛋白生物标志物是液体活检中最常应用的检测手段,但传统的蛋白质检测方法灵敏度不足,对于一些低丰度蛋白的检测具有较大的局限性。单分子阵列技术(Simoa)是一种超灵敏的基于磁珠的数字化酶联免疫吸附测定。该技术将含有单个免疫复合物的珠子加载到微孔中(~46 fL)并通过酶催化反应产生荧光,并通过测量圆盘上的阵列中的荧光微孔的数量确定目标分子的浓度。本文基于单分子阵列技术,发展了Fn14、P-Cadherin和N-Cadherin三个生物标志物的超灵敏检测,具体如下:1.成纤维细胞生长因子诱导型-14(Fn14)是一种受体蛋白,在癌症和其他一些疾病的进展中起重要作用。在此,基于Simoa开发了用于检测Fn14的超灵敏测定法。为了获得Fn14检测的更好性能,优化了包括试剂浓度和测量参数的测定条件,并筛选了44种不同的抗体对。Fn14的检测范围为1.26 pg/mL至3,683pg/mL,检出限低至0.32 pg/mL,远低于常规ELISA。2.P-Cadherin的过表达与一些恶性疾病的发生有关。在本文中,我们所开发的用于P-Cadherin的Simoa测定在1.38 pg/mL至1,886 pg/mL的动态范围内显示出良好的线性,其检出限低至0.65 pg/mL。3.N-Cadherin是关键的跨膜细胞粘附分子,其过表达同样与癌症等恶性疾病的发展有关。在这个工作中,我们开发了一种新的N-Cadherin的超灵敏度检测方法。该方法的线性范围为11.40 pg/mL至10,500 pg/mL,检出限为2.85 pg/mL,远远低于常规免疫测定的检测限,这使得我们即使在非常低的浓度下也可用于精确定量血清中的N-Cadherin蛋白。本文中我们所发展的测定的操作是自动化的,仅需要大约一个小时来完成。此外,这些测定均成功应用于血清基质中加标样品的测定,且性能良好,在血清基质中具有良好的选择性和适用性。
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