云霄县PRRS血清学调查及3株PRRSV GP5基因分析

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:kathleen350191539
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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是对养猪业危害最大的疾病之一,每年给全世界带来巨大的经济损失。PRRS可导致猪群出现精神倦怠,厌食发热,早产、流产、死胎、木乃伊及弱仔等症状,并影响免疫调节功能。云霄县是漳州市生猪重要基地之一,PRRS的流行也给云霄县的养猪业带来严峻的挑战。本研究通过对猪群进行PRRS抗体检测和抗原检测,分析目前云霄县PRRSV的流行及遗传变异情况,为云霄县对PRRS的防控提供理论基础。本研究采集了云霄县2013-2017年种猪场、商品代饲养场、散养场己免疫蓝耳病疫苗的猪血清样本共计3865份。对不同年份、季节的血清样品进行PRRS免疫阳性率进行调查。为进一步了解云霄县PRRSV的遗传变异发生情况,本研究针对GP5基因设计一对特异性引物,对采集的临床病料进行RT-PCR检测并进行测序,从阳性样品中选取3株同源性较低的基因序列进行分析。对测序序列进行抗原位点、糖基化位点、磷酸化位点、跨膜结构、二级结构分析,并与NCBI里的参考毒株序列进行比对分析。本研究取得如下结果:1.2013-2017年猪血清PRRS抗体阳性率最高的是2013年(84.85%),最低的是2014年(82.90%);不同类型养殖场的抗体阳性率存在差异,抗体阳性率的大小排列顺序为种猪场(87.73%)>商品代饲养场(83.13%)>散养户(77.50%)。猪群夏秋两季的抗体阳性率明显高于冬春两季。2.经测序分析表明,3株PRRSV与参考株的同源性在61.9%-99.5%之间。FJYX-1相对参考株,在第23、41位氨基酸出现了磷酸化位点变异,FJYX-2在第23位氨基酸出现了磷酸化位点变异;FJYX-3序列相对参考株未见明显变异。3株PRRSV糖基化位点未见明显变异。将3株PRRSV GP5蛋白氨基酸序列与参考株进行比对分析表明,FJYX-1第15、23、41、196位氨基酸位点分别发生了脯氨酸、丝氨酸、丝氨酸、精氨酸变异,FJYX-2第23、151、196位氨基酸分别发生了丝氨酸、赖氨酸、精氨酸变异,FJYX-3第28、33、193、196位氨基酸分别发生了脯氨酸、谷氨酰酸、丙氨酸、组氨酸变异。对所测序列翻译成氨基酸后进行同源性分析(图3-5)抗原肽段预测结果表明这3个毒株的GP5蛋白存在7-8个抗原位点,其中FJYX-2毒株抗原位点多出了一个143-NFLLDTK-149抗原肽段。综上所述,目前云霄县的PRRS免疫阳性率较好。从实验分析的3株PRRSV与参考毒株对比结果来看,糖基化位点未见明显的变异,而磷酸化位点、氨基酸位点和抗原肽段都存在一定程度的变异,我们需要密切监视PRRSV的变异情况,为云霄县PRRSV的防控提供有效的理论依据。
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