【摘 要】
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伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的急性传染病,可导致多种家畜和野生动物出现发热、奇痒（猪除外）及脑髓炎等主要症状。猪是PRV的主要宿主和传染源,仔猪感染后主要表现为神经症状,哺乳仔猪死亡率可达100%,妊娠母猪感染后可导致流产、产死胎和木乃伊胎,是严重危害我国养猪业的一个重要传染病。疫苗免疫是防制伪狂犬病的主要措施,目前P
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伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的急性传染病,可导致多种家畜和野生动物出现发热、奇痒（猪除外）及脑髓炎等主要症状。猪是PRV的主要宿主和传染源,仔猪感染后主要表现为神经症状,哺乳仔猪死亡率可达100%,妊娠母猪感染后可导致流产、产死胎和木乃伊胎,是严重危害我国养猪业的一个重要传染病。疫苗免疫是防制伪狂犬病的主要措施,目前PR疫苗毒株在我国应用最广泛的是Bartha-K61株,该毒株呈gE基因自然缺失表型,其毒力相对较弱的同时保留良好的免疫原性,是世界上公认的优良疫苗株。本研究以ST传代细胞培养的PRV培养物（Bartha-K61株）分别与配方①、②、③和常规5%蔗糖明胶等体积混合后,用冻干方法A和B分别冻干制备猪PR耐热保护剂活疫苗和猪PR常规保护剂活疫苗。随机抽取不同的疫苗进行性状检验、无菌检验、支原体检验、鉴别检验、安全检验、病毒含量检验、剩余水分、真空度和耐老化测定,以期筛选出合适的耐热保护剂配方和匹配的冻干方法。结果显示,冻干的疫苗均呈淡黄色海绵状疏松团块,易与瓶壁脱离,加稀释液后迅速溶解;无细菌、霉菌和支原体生长;疫苗中仅含猪PRV（Bartha-K61株）,安检免疫猪精神、食欲、体温无异常,没有出现因注射疫苗引起的局部或全身不良反应;病毒含量均不低于106.25 TCID50/头份;剩余水分含量均小于4.0%;真空度出现紫色辉光;耐老化试验发现,采用配方③和方法A冻干的疫苗优于其它组合。以上述工艺试制备了 3批猪PR耐热保护剂活疫苗,并与猪PR活疫苗进行了效力评价。第一组为试制备的3批猪PR耐热保护剂活疫苗,第二组为猪PR活疫苗,分别采用病毒含量测定法、免疫攻毒法（将25头20～25日龄健康仔猪随机分为5组,每组5头;其中4组分别免疫两组疫苗各1头份/头,另外1组为空白对照组,免疫10天后攻击PRV GD1株强毒1.0 mL/头）、IDEXX试剂盒检测仔猪免疫后不同日龄的抗体（Antibody,Ab）水平（将25头20～25日龄健康仔猪随机分为5组,每组5头;其中4组分别免疫两组疫苗各1头份/头,另外1组为空白对照组。）和耐老化试验方法（两组疫苗放37℃保存7日、10日、13日和放2～8℃保存18和24个月后测病毒含量）。结果显示,两组疫苗的病毒含量均≥106.6 TCID50/头份;免疫组仔猪均能抵抗强毒攻击,对照组仔猪5/5死亡;免疫的仔猪均能较快检测到高滴度Ab,Ab 阳性至少维持365日;猪PR耐热保护剂活疫苗在37℃保存13日、2～8℃保存24个月后病毒含量依然可达106.15 TCID50/头份以上,明显高于耐热后猪PR活疫苗（Bartha-K61株）的病毒含量,前者在耐热性能方面有较大的优势。本研究对猪PR耐热保护剂活疫苗对变异强毒株的保护效力进行了评价。将20头20～25日龄仔猪和20头86～90日龄妊娠母猪分别随机分成2组,免疫组和对照组各10头,免疫10日后,分别攻击PRV ZLT和PRV HN变异强毒株1.0 mL（病毒含量106.0TCID50/mL）,攻毒后逐日观察并测温14日。结果显示,免疫组仔猪均能抵抗强毒攻击,对照组仔猪全部死亡;免疫组妊娠母猪均能抵抗强毒攻击,无不良反应,对照组母猪均发病。综上所述,本研究筛选出了合适的耐热保护剂配方③和冻干方法A,制备的猪PR耐热保护剂活疫苗与常规猪PR活疫苗无明显差异,但耐热性能较优。该工艺稳定可控,猪PR耐热保护剂疫苗可保存在2～8℃,有效期可达24个月,降低了疫苗的保存条件和在长途运输中失效的风险,且对流行毒株具有良好的保护效力,在疫苗的实际应用过程中具有重要意义。
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