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A型流感病毒(Influenza A Virus,IAV)广泛感染禽类与哺乳动物,而B型流感病毒只感染人类。基于病毒表面糖蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的不同组合,IAV可以进一步分为多种亚型。目前为止,共鉴定出17种HA和10种NA。其中一些重组的IAV基因型(包括H5N1,H9N2,H7N2和H6N5)会引起人类的致命性感染。自噬是细胞对受损细胞器,废旧蛋白和入侵微生物进行吞噬降解和再利用的过程,已有越来越多的自噬相关蛋白被发现参与自噬的形成。自噬由液泡排列相关蛋白34(VPS34)活化引起,VPS34是种已知的III型磷脂酰肌醇激酶(PI3K-III),其磷酸化底物磷脂酰肌醇(PI3P)可以和Beclin-1,ATG14L,VSP15组成蛋白复合物,为自噬小体形成所必需。ULK1是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,可以与自噬相关蛋白13(ATG13)和分子量大小为200kD的黏着斑激酶家族相互作用蛋白(FIP200)相互作用。VPS34由ULK1激活,激活后PI-4,5将会被催化成PI3P,活化的蛋白复合物将用于参与自噬双层膜的形成并延长形成自噬体。ULK1的活性受哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和AMP激活的蛋白激酶(AMPK)调节,这两种激酶对营养和能量变化都十分敏感,分别可以在不同的丝氨酸残基处磷酸化ULKI,并对ULK的活性具有相反作用:mTOR可以在丝氨酸残基757(ULK1S757)位点磷酸化ULK1并抑制其活性;而AMPK可以在丝氨酸残基317,555,777(ULKlS317/S555/S717)多个位点激活ULK1。c-Jun末端激酶(JNK)是一种应急激活的蛋白激酶,可以通过磷酸化Bcl-2,促进Bcl-2与Beclin-1的解离来调节自噬。Beclin-1是参与形成自噬的起始复合物,Beclin-1还可以被AMPK磷酸化从而从Bcl-2-Beclin-l复合物中解离参与自噬。不同亚型IAV的非结构蛋白(NS1)可以不同程度地调节JNK和PI3K活性。然而,JNK和PI3K不同程度的激活是否会影响自噬以及IAV的复制目前仍不清楚。我们比较了三种不同亚型IAV感染鸡胚胎成纤维细胞(CEF)后JNK和PI3K的通路激活情况,并分析了 JNK激活是否参与病毒诱导的自噬以及调控影响病毒复制。结果显示,H5N1(A/mallard/Huadong/S/2005)毒株诱导CEF发生完全自噬,表现为随着感染时间和感染剂量的增加微管相关蛋白1轻链3(LC3)脂化水平增加,泛素结合蛋白p62蛋白降解。两种自噬阻断剂巴弗洛霉素A(Baf A)和氯喹(CQ)均能阻断H5N1引起的自噬,表现为LC3脂化进一步增多,p62降解却被阻断。荧光共聚焦结果显示,H5N1病毒感染LC3偶联的绿色(GFP)和红色(RFP)双荧光鸡胚胎成纤维细胞系(DF1)后,细胞内形成自噬溶酶体。H9N2(A/chicken/Shanghai/F/98)病毒可以微弱诱导细胞自噬,而 H1N1(A/PR/8/34,PR8)毒株阻断了自噬流,表现为LC3脂化和p62表达水平同步增加。H5N1病毒感染细胞后,JNK磷酸化水平增加,AKTS473,S6K1T389,S6S235/236,和ULK1S757磷酸化水平降低,表明H5N1可以激活JNK信号通路并阻断PI3K信号通路。与此同时,H9N2病毒微弱激活JNK但显著激活PI3K信号通路。而H1N1可以激活PI3K信号通路但不激活JNK。此外,我们发现JNK抑制剂SP600125在CEF细胞上可以抑制H5N1诱导的细胞自噬并影响病毒的复制。我们的研究首次提供证据表明,H5N1可以诱导完全自噬而H1N1阻断细胞自噬流。同时还发现,JNK促进IAV诱导细胞自噬,并通过诱导自噬对病毒复制产生影响。