【摘 要】
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作为一种新型免疫分析方法,时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)选用稀土络合物作为标记物,这类标记物荧光寿命长、Stokes位移大、特征峰尖锐,因此可以通过延迟测量时间的方法,有效地消
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作为一种新型免疫分析方法,时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)选用稀土络合物作为标记物,这类标记物荧光寿命长、Stokes位移大、特征峰尖锐,因此可以通过延迟测量时间的方法,有效地消除背景荧光的干扰,从而具备了相比一般免疫分析方法更高的灵敏度。本工作的主要目的是建立基于AP酶的ELISA和荧光酶免疫分析(FEIA),以及时间分辨荧光免疫分析方法,其中涉及到稀土螯合物BBCAP、BHHCT和抗体的偶联,以及使用时间分辨荧光免疫分析方法进行免疫球蛋白抗体的测定。本论文研究的主要内容有:(1)以BBCAP作为配体,与羊抗小鼠IgG偶联,测定其免疫特性。(2)合成BHHCT-羊抗小鼠IgG偶联物,并对Eu3+标记抗体技术进行了实验研究,讨论了Eu3+浓度、稀释后的偶联物与Eu3+使用液混合后放置时间、Eu3+放置时间、偶联物稀释倍数、光致漂白效应、温度、Wallac洗液对免疫反应的影响。优化后采取的实验条件为:Eu3+使用浓度为1*10-5M,偶联物稀释倍数为20倍、偶联物与Eu3+使用液混合后放置时间为60min。(3)以小鼠IgG为抗原,羊抗小鼠IgG为抗体,建立了竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)、荧光酶免疫分析(FEIA)和时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)体系,ELISA、FEIA、TRFIA达到的灵敏度分别为IC(20)=2.477μg/mL,IC(50)=21.115μg/mL;IC(20)=2.522μg/mL, IC(50)=30.723μg/mL; IC(20)=0.113μ g/mL, IC(50)=1.131μg/mL。
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