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LIM同源域蛋白Islet-1和Lhx3对神经系统和内分泌腺的细胞增殖和分化等发育过程中具有重要的调节作用。Islet-1和Lhx3在松果体中的表达已有研究报道,但有关这两种转录因子在松果体发育过程中的变化及其功能尚不清楚。本研究主要以鸡胚作为实验动物,采用RT-PCR和免疫组织化学方法研究了Islet-1和Lhx3在松果体发育过程中的表达变化,通过免疫组织化学双标记的方法研究了Islet-1的表达与松果体细胞增殖和分化的关系。此外,通过体内和体外实验研究了鸡胚松果体细胞的增殖是否受雌激素的调节。在此基础上,以绵羊为实验动物,比较和分析了哺乳动物和鸟类松果体中Islet-1和Lhx3的表达的异同。主要研究结果包括下列几方面:
一、在鸡胚发育的的第四天(E4)可检测到Islet-1阳性细胞,阳性细胞率为1.05±0.0426%,在之后的发育过程中,Islet-1阳性细胞率显著增加(P<0.05),在胚胎发育的E12.5,Islet-1阳性细胞率达到40.05±0.54%,但在之后的发育过程中无显著变化(P>0.05)。Islet-1主要在松果体囊泡细胞(follicularpinealocytes)和松果体囊泡旁细胞(parafollicularpinealocytes)的细胞核中表达。鸡胚松果体Lhx3表达的研究结果证明,Lhx3在E4.5开始表达,Lhx3阳性细胞率明显低于Islet-1,但Lhx3表达的细胞类型和在发育过程中的变化与Islet-1相似。Lhx3和Islet-1免疫组织化学双标记结果显示,从E6.5直到出生,鸡胚松果体中几乎所有的Lhx3阳性细胞都表达Islet-1。上述研究结果显示,Islet-1和Lhx3可能通过细胞内的相互作用来调节松果体的发育。
二、对鸡胚发育过程中松果体细胞增殖状态的研究结果证明,增殖的细胞多位于囊泡腔的外侧。从胚胎发育的E4到E6.5,有80%-90%的细胞为细胞核增殖抗原(PCNA)阳性。在此之后的发育过程中,PCNA阳性细胞率明显减少,E8.5时降至56%,并持续到新生期。Islet-1和PCNA免疫组织化学双标记结果显示,从E8.5到新生期鸡胚的松果体中,约10%的Islet-1阳性细胞表达PCNA。在鸡胚发育后期几乎所有的Islet-1和Lhx3阳性细胞都表达5-HT。这些结果表明,Islet-1和Lhx3的表达与松果体细胞的增殖无明显的相关性,但参与调节松果体细胞的分化和褪黑素的分泌。
三、本实验中采用免疫组织化学、RT-PCR和Western-blot等方法在鸡胚松果体中未检测到雌激素受体α(estrogenreceptor,ERα)的表达。但通过体内和体外实验证明一定剂量的雌激素(17-βestradio,E2)能够促进鸡胚松果体细胞的增殖,而ER特异性抑制剂(ICI182,780)不影响外源性雌激素对松果体细胞增殖的调节作用。这些研究结果证明E2对鸡胚松果体细胞增殖的调节可能不是通过ER途径进行的。
四、绵羊松果体中Islet-1和Lhx3阳性细胞的分布具有相似的模式,并且Islet-1和Lhx3阳性细胞率呈相似的变化趋势。绵羊胎儿发育至90天时,在松果体中能够检测到Islet-1和Lhx3的表达,阳性细胞率分别为14.11±0.19%和5.14±0.021%。在以后的发育过程中,Islet-1和Lhx3阳性细胞率都逐渐增加,到新生期分别为74.37±0.13%和71.67±0.0317%。从2到7月龄Islet-1和Lhx3阳性细胞率都维持在80%以上,其中4、5月龄的Islet-1和Lhx3阳性细胞率明显高于其它时期(P<0.05)。通过比较可以看出,Islet-1和Lhx3在绵羊胚胎松果体中的表达模式与鸡胚中相似。
五、绵羊胚胎期松果体细胞增殖较多,胎儿120天时达到30%,出生后增殖细胞较少,维持在8%左右。出生后几乎所有的Islet-1和Lhx3阳性细胞都表达5-HT。研究结果提示Islet-1和Lhx3可能对绵羊松果体细胞的分化及分化状态的维持和松果体细胞褪黑素分泌功能的成熟起重要的调节作用。
综上所述,绵羊胎儿和新生期松果体中Islet-1和Lhx3的表达变化与鸡胚松果体中的相似,Islet-1和Lhx3的表达可能与松果体细胞的分化、松果体细胞分泌功能的维持有密切关系。有关的细胞和分子机理有待进一步的研究证实。