【摘 要】
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盐单胞菌(Halomonassp.)C6分离自新疆地区的盐湖.该菌可在NaCl浓度为0-25﹪的条件下生长,最适生长NaCl浓度为3-10﹪.该室已经从该菌分离得到了一段与耐盐有关的3.24KbDNA片段,经
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盐单胞菌(Halomonassp.)C6分离自新疆地区的盐湖.该菌可在NaCl浓度为0-25﹪的条件下生长,最适生长NaCl浓度为3-10﹪.该室已经从该菌分离得到了一段与耐盐有关的3.24KbDNA片段,经过开放阅读框架分析,发现它含有3个ORF.在正链上含有2个ORF,其中ORF1含有1707个碱基,而ORF2含有366个碱基,它完全嵌合在ORF3中.ORF3位于负链上,含有924个碱基.对ORF1用PvuII和ClaI进行酶切,并与穿梭载体pBBR1MCS-5连接,将重组质粒转化大肠杆菌(Escherichiacoli)DH5α,得到转化子DYT1.以DYT1为供体菌,pRK2013为辅助质粒,以费氏中华根瘤菌(Sinorhizobiumfredii)的盐敏感菌株RC3-3为受体菌,进行三亲本杂交.将用PCR方法扩增出的含有hstA基因的DNA片段用XbaI和XhoI酶切后,分别与表达载体pThiHisA、B&C系列载体连接.将重组表达质粒分别转化大肠杆菌Top10,得到3个重组表达质粒pDYA、pDYB和pDYC.将得到的转化子用IPTG进行诱导表达,初步得到分子大小为70KD左右的可能融合蛋白.
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