目的:1.研究转录因子SP1对下丘脑GT1-7神经细胞中KiSS-1基因启动子活性的影响。2.探讨AMPK对下丘脑GT1-7神经细胞中转录因子SP1转位的影响。方法:1.建立KiSS-1基因启动子报告基因体系,用Promega荧光素酶双报告基因检测系统检测SP1SiRNA及SP1抑制剂Mithramycin A对GT1-7细胞KiSS-1基因启动子活性的影响。2.用AMPK激动剂AICAR、AMPK抑制剂Compound C和AMPKα1-SiRNA干预GT1-7细胞后,分别提取细胞浆蛋白、核蛋白和总蛋白,用Western Blot方法检测转录因子SP1蛋白表达的变化。3.用AICAR、Compound C孵育细胞,用免疫荧光法来进一步证实Western Blot的结果。结果:1.用SP1SiRNA以及不同浓度的Mithramycin A作用于下丘脑GT1-7细胞后, KiSS-1基因的启动子活性被明显抑制。2. AICAR可以降低GT1-7细胞核蛋白中SP1的水平而相应的增加浆蛋白中SP1的水平,相反的, Compound C和AMPKα1-SiRNA都能够增加GT1-7细胞核蛋白中SP1的水平而相应的降低浆蛋白中SP1的表达水平。无论是AICAR,还是Compound C或AMPKα1-SiRNA都没有使GT1-7细胞总蛋白中SP1的含量发生显著性的改变。3.免疫荧光的结果提示AICAR能抑制SP1向细胞核的转位,而Compound C则能增加SP1向细胞核的转位,与我们Western Blot的结果相符。结论: AMPK对KiSS-1基因表达的抑制作用可能是通过抑制转录因子SP1的转位而减弱了SP1对KiSS-1基因启动子的激活作用而造成的。