基于糖氧剥夺/复供损伤SD大鼠星形胶质细胞和神经元的脉络宁抗炎机制研究

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目的:研究脉络宁注射液于SD大鼠神经元和星形胶质细胞在糖氧剥夺/复供损伤后发挥的保护作用和抗炎机制。方法:将神经元和星形胶质进行分离提取及鉴定,运用Transwell建立二者的共培养体系。通过显微镜下观察细胞形态,用共聚焦显微镜对神经元和星形胶质进行鉴定。用物理法(95%N2+5%CO2)建立SD大鼠神经元与星形胶质糖氧剥夺/复供损伤模型.用CCK-8法筛选脉络宁最佳保护浓度并测定脉络宁不同浓度的干预对糖氧剥夺/复供损伤后的神经元和星形胶质细胞保护作用。用试剂盒法测不同浓度的脉络宁预处理后对神经元和星形胶质漏出量的影响。采用western blot检测GLT-1及加入其抑制剂DHK后GLT-1的蛋白表达量。试剂盒法测糖氧剥夺/复供损伤后神经元和星形胶质共培养分泌的上清液中TNF-α、IL-1β的表达量。蛋白免疫印迹法检测各个浓度的脉络宁预处理的星形胶质细胞糖氧剥夺/复供损伤后p-NF-κB p65及IκBα蛋白表达的变化。结果:提取分离并培养出了高纯度的SD大鼠的神经元和星形胶质,神经元和星形胶质共培养的体系成功得以建立;脉络宁干预过的糖氧剥夺/复供损伤的SD大鼠神经元和星形胶质的存活率水平明显提高;脉络宁干预后的星形胶质的谷氨酸转运体(GLT-1)蛋白表达量明显上调;LDH水平明显下降;TNF-α、IL-1β的表达量显著降低,说明脉络宁具有抗炎作用。加入谷氨酸转运体抑制剂DHK后炎性因子TNF-α、IL-1β的表达有所升高,说明脉络宁对神经元的保护作用可能与星形胶质上的谷氨酸转运体(GLT-1)有关。结论:脉络宁注射液可以减轻神经元和星形胶质糖氧剥夺造成的损伤。它的神经保护作用可能与星形胶质细胞膜上的谷氨酸转运体(GLT-1)的转运能力、降低炎症因子的表达、以及抑制NF-κB的活化等有关。
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