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Tie2／TEK是胚胎血管发育和肿瘤血管形成都需要的内皮细胞酪氨酸激酶受体，血管生成素Angl(angiopoietin)是其配体，正常成人组织中，Angl／Tie2受体水平较低，用于维持成熟的血管结构；一般癌组织中．Angl／Tie2的表达较为活跃。Angl／Tie2在血管形成中具有重要调节作用；可溶性Tie2在体液中同配体Angl结合，阻止血管内皮细胞上的Tie2受体酪氨酸激酶的磷酸化，阻断了Angl／Tie2信号传导系统的传导，使血管不能生成，所以可溶性Tie2在治疗肿瘤方面有一定的前景。从上面的论述我们知道：要想阻断Angl／Tie2系统的信息通路，有以下两种方法：1． 表达可溶性Tie2片段，用它去中和游离的Angl；2． 制备抗Tie2抗体，阻断Angl和Tie2受体结合。基于以上两点，我们作了如下工作：从胎盘组织中克隆出Tie2基因的膜外区，将Tie2的前360个氨基酸同IgG的Fc融合，插入B7载体，并在CH0中表达可溶性Tie2片段，ELISA检测出Tie2蛋白。构建一个半合成抗体库，不经免疫制备人源抗Tie2 Fab抗体。通过RT-PCR方法，从人脐带血淋巴细胞总RNA扩增轻链基因及部分重链VH段基因，将轻链基因插入DCOMb3载体中，得人轻链质粒库；从HBsAb的Fd段基因制备含有不同长度随机化CDR3的FR3-CDR3-J-CH1片段，然后将VH段基因与随机化的CDR3融合，得到Fd基因片段，再将其插入轻链质粒库中，得半合成人Fab质粒库。 通过多次建库，获得总容量为2×107的半合成抗体库。其Fd段和轻链基因的重组率为50％。用Tie2抗原包被ELISA板条，经三轮淘洗，从噬菌体抗体库中筛选到与Tie2抗原特异结合的噬菌体克隆。测序确定所得抗体的基因序列，胚系基因分析表明该抗体基因重链属于VH4基因家族，是DP-66、 D7-27、 JH3a重排产物；轻链属于V κ 1家族，是DP κ 3， J κ 2重排产物。重链CDR3的区序列，符合最初的(NNK)8的随机化设计。