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第一部分VEGF对6-羟多巴胺诱导PC12细胞损伤的保护作用目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞变性损伤的保护作用及机制。方法用PC12细胞制作帕金森病细胞模型,采用四甲基偶氮唑盐法检测暴露于梯度浓度VEGF165后细胞的活性;流式细胞术检测对照组、损伤组(单加6-OHDA)、VEGF组(单加VEGF165)和VEGF保护组(同时加6-OHDA和VEGF165)细胞凋亡率(每组5个样本);免疫印迹法检测PC12细胞VEGF165及其受体fms样酪氨酸激酶-1(Flt-1)、胎肝激酶-1(Flk-1)、神经纤毛蛋白-1(Nrp-1)的表达,并观察VEGF165及其受体中和抗体对VEGF165作用的影响。结果随着VEGF165的浓度增加到50～100 ng/ml时,PC12细胞吸光度由0.14±0.06逐步上升至0.35±0.08(P <0.01),随后又稍下降;细胞凋亡率VEGF保护组(29.65%±6.63%)低于损伤组(57.10%±5.66%),但高于VEGF组(3.67%±1.51%)和对照组(4.76 %±1.06%),P <0.01;免疫印迹实验检测到PC12细胞有VEGF165及Flt-1和Nrp-1的表达,而未检测到Flk-1;抗VEGF165和抗Nrp-1中和抗体可阻断VEGF165的作用,而抗Flt-1抗体无作用。结论VEGF165可保护PC12细胞因6-OHDA造成的损伤, Nrp-1受体在其中发挥重要作用。第二部分腺病毒介导的VEGF165基因转移保护6-羟多巴胺诱导的PC12细胞损伤目的探讨腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF)基因转移对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的多巴胺能细胞损伤的保护作用。方法用腺病毒载体携带VEGF165基因(Ad-VEGF165)感染PC12细胞,并设腺病毒携带的β-半乳糖苷酶基因(Ad-LacZ)感染组和磷酸盐缓冲液(PBS)处理组作对照,基因转移成功后,用6-OHDA处理细胞,另加设不用6-OHDA处理的正常对照组。四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定细胞活性,免疫荧光细胞化学法检测细胞酪氨酸羟化酶(TH)表达,高效液相色谱检测细胞分泌功能。结果腺病毒在30 MOI以上感染强度时能高效感染PC12细胞。Ad-VEGF165感染组的PC12细胞经6-OHDA处理后吸光度A570 (0.31±0.07)高于Ad-LacZ感染组(0.15±0.07)和PBS处理组(0.13±0.05),但低于正常对照组细胞(0.55±0.10),P < 0.01;免疫荧光染色显示Ad-VEGF组细胞胞浆平均荧光强度(86.75±21.62)高于Ad-LacZ组(51.53±17.49)及PBS组(54.19±15.82),但低于正常对照组(110.39±24.21)(P < 0.05);Ad-VEGF感染组细胞培养液中多巴胺和去甲肾上腺素含量也高于Ad-LacZ感染组和PBS处理组。结论腺病毒介导的VEGF基因转移对6-OHDA诱导的多巴胺能细胞损伤具有保护作用。第三部分腺病毒介导的VEGF基因转移对帕金森病大鼠多巴胺能神经元的保护作用目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)基因转移对帕金森病(PD)大鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法携带VEGF165基因的腺病毒(Ad-VEGF165)载体感染大鼠一周后,纹状体注射6-羟基多巴胺制作大鼠多巴胺能神经元损伤的PD模型。采用大鼠旋转行为观察、免疫组织化学方法和高效液相色谱技术检测VEGF165基因转移的PD大鼠行为学变化、黑质纹状体酪氨酸羟化酶(TH)、层粘蛋白(laminin)和胶质纤维原性酸性蛋白(GFAP)的表达以及纹状体区多巴胺(DA)及代谢产物含量变化。并与重组腺病毒载体(Ad-LacZ)组及磷酸盐缓冲液(PBS)组进行比较。结果Ad-VEGF165成功感染PD大鼠并高表达目的基因和蛋白。感染Ad-VEGF165的大鼠获得行为学改善,其黑质和纹状体TH阳性细胞数和纤维密度与对侧半球的比值(0.42±0.11和0.56±0.10)高于Ad-LacZ组(0.20±0.10和0.28±0.09)和PBS组(0.22±0.13和0.24±0.08),P<0.01;纹状体区血管和胶质细胞数量均明显增多;Ad-VEGF165感染组大鼠纹状体区DA及代谢产物含量与对侧比值也高于对照组。结论Ad-VEGF基因转移能保护PD大鼠多巴胺能神经元,血管和胶质细胞的增生可能参与了VEGF对在体多巴胺能神经细胞的保护机制。第四部分纹状体内VEGF基因转移挽救帕金森病大鼠多巴胺能神经元目的观察血管内皮生长因子基因转移能否挽救帕金森病(PD)大鼠多巴胺能神经元变性损伤。方法先采用6-OHDA注射制备纹状体损伤的大鼠PD模型,一周后,腺病毒载体携带VEGF165基因(Ad-VEGF165)感染PD模型大鼠纹状体,观察大鼠旋转行为及黑质和纹状体区酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学变化。并与重组腺病毒载体(Ad-LacZ)组及磷酸盐缓冲液(PBS)组进行比较。结果腺病毒(Ad)感染PD大鼠后高表达目的基因和治疗蛋白;Ad-VEGF165感染组动物行为学获得改善,同时其黑质和纹状体TH阳性细胞数和纤维密度与对侧半球的比值(0.34±0.13和0.38±0.14)高于Ad-LacZ组(0.21±0.10和0.25±0.08)和PBS对照组(0.22±0.13和0.20±0.11),P<0.01。结论Ad介导的VEGF基因转移能部分挽救PD模型大鼠多巴胺能神经元,抑制其变性损伤。