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目的：探讨毒死蜱对高脂饮食致动脉粥样硬化形成的影响及相关机制。方法：1.32只健康雄性新西兰兔随机分为如下四组(n=8)：对照组、毒死蜱组、高脂饮食组、高脂饮食+毒死蜱组。高脂饮食配方为通用配方,毒死蜱的剂量为(20 mg/kg/d,毒死蜱兔的口服LD50为1000-2000 mg/kg),连续观察6个月。2.动物处死前从耳缘静脉取血并分离出血清储存,用于检测血脂水平和胆碱酯酶(AChE)、对氧磷酶1(PON1)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及丙二醛(MDA)的含量,及相关肝、肾功能指标。3.收集并培养腹腔巨噬细胞,测定其胆固醇流出率。4.切取一段胸主动脉采用离体血管环灌流法检测血管舒缩功能。5.采用苏丹Ⅳ染色法观察胸主动脉粥样硬化斑块,计算斑块与血管内皮表面积的百分比。颈总动脉、主动脉弓作石蜡切片,用以观察血管的形态学变化。6.采用实时定量PCR和蛋白印迹法分别检测肝、血管组织和腹腔巨噬细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ABCA1)的表达以及肝脏PON1的表达。结果：1.高脂饮食6个月,其血浆总胆固醇和脂蛋白水平明显升高,SOD活性降低,而MDA水平升高,其肝脏、主动脉和腹腔巨噬细胞中ABCA1的表达升高,腹腔巨噬细胞中胆固醇流出增加,肝脏中PON1的表达降低,与对照组相比,均有显著性差异；其主动脉和颈总动脉有明显的动脉粥样硬化斑块形成。但血清AChE有轻度升高,但无显著性差异。2.毒死蜱组兔血清AChE和PON1、和SOD活性和HDL-C水平降低,MDA水平升高,与对照组比较有显著性差异；肝肾功能指标与对照组比,无显著性差异。主动脉和腹腔巨噬细胞ABCA1的表达、肝脏PON1的表达均有降低,腹腔巨噬细胞中胆固醇流出减少,与对照组比较有显著性差异。3.高脂饮食+毒死蜱组PON1、和SOD活性和HDL-C水平降低,MDA水平升高,主动脉和腹腔巨噬细胞ABCA1的表达、肝脏PON1的表达均有降低,腹腔巨噬细胞中胆固醇流出减少,与单高脂饮食组或毒死蜱组相比,上述指标的改变更明显,统计学处理有显著性差异。主动脉和颈总动脉粥样硬化斑块更加明显。但血清AChE无明显改变。结论：亚毒性剂量的毒死蜱可加快高脂饮食致动脉粥样硬化形成,加重血清中总胆固醇、脂蛋白、及其它生化指标的改变,其机制可能与毒死蜱消耗有抗氧化作用的PON1和降低其活性,从而间接或直接触发氧化应激,损伤内皮功能,降低体内ABCAl的表达,继而减少胆固醇流出有关。目的：探讨对氧磷对Ox-LDL诱导的鼠源巨噬细胞性泡沫细胞形成及相关机制方法：1.将RAW264.7巨噬细胞,分为下例5组：(1)对照组,(2)Ox-LDL泡沫细胞模型组,(3-5)组分别为Ox-LDL+对氧磷(1、10和100μmol／1)组。各组细胞置5%CO2培养箱,37℃，常规培养72 h。2.油红染色进行形态学观察,高效液相色谱法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)水平,及胆固醇流出率。3.采用实时定量PCR和蛋白印迹法分别检测巨噬细胞中CD36、ABCA1、和酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)的表达。结果：1. Ox-LDL处理48 h后,与正常巨噬细胞相比,油红0染色阳性细胞显著增加,细胞体积明显增大,形态多呈圆形或不规则形；对氧磷(10, 100μmol/l)组细胞油红0染色阳性细胞比Ox-LDL模型组形态学改变更明显,细胞体积明显增大,而对氧磷(1μmol/l)组细胞与模型组相比没有显著性差异。2.泡沫细胞模型组细胞内TC、FC、CE水平显著高于对照组,且CE/TC有显著性差异；对氧磷(10,100μmol/l)组细胞内TC、FC、CE水平及CE/TC均有显著性增加,与泡沫细胞模型组相比,有显著性差异,对氧磷(1μmol/l)组TC、FC、CE与泡沫细胞模型组差异无显著性。3. Ox-LDL泡沫细胞模型组细胞胆固醇流出率显著性增加,与对照组相比,有显著性差异；对氧磷(10和100μmol/l)组细胞胆固醇流出率显著性降低,与泡沫细胞模型组相比,有显著性差异；对氧磷(1μmol/l)处理组与泡沫细胞模型组相之间无显著性差异。4. Ox-LDL刺激的泡沫细胞组与对照组比CD36 mRNA表达显著增加,Ox-LDL刺激的泡沫细胞加对氧磷(10和100μmol/l)组与泡沫细胞组相比CD36 mRNA表达显著增加。对氧磷(1μmol/l)处理组与泡沫细胞模型组相比没有显著性差异。5.泡沫细胞模型组ABCA1表达较对照组显著增加；与模型组相比,对氧磷(10和100μmol/l)显著地下调了泡沫细胞中ABCA1的表达,而对氧磷(1μmol/l)没有影响泡沫细胞中ABCA1的表达。6.泡沫细胞模型组ACAT1mRNA表达较对照组显著增加；与模型组相比,对氧磷(10和100μmol/l)组显著地增加了泡沫细胞中ACAT1的表达,而对氧磷(1μmol/l)处理组没有明显增加泡沫细胞的ACAT1 mRNA表达。结论：对氧磷能加速Ox-LDL诱导的鼠源巨噬细胞性泡沫细胞形成。其机制可能与对氧磷上调泡沫细胞中CD36和ACAT1表达而降低ABCA1的表达有关。目的：探讨对氧磷下调鼠源巨噬细胞性泡沫细胞ABCA1表达和胆固醇流出的机制方法：1.将Ox-LDL刺激形成的鼠源巨噬细胞性泡沫细胞分为以下组：(1)对照组,(2)对氧磷处理组：对氧磷(1,10和100μmol/1)孵育泡沫细胞24h；对氧磷(100μmol/1)孵育泡沫细胞(6,12,24)h。2.高效液相色谱法测定测定细胞内TC及FC水平,计算CE,测定胆固醇流出率。3.采用ELISA法检测泡沫细胞内cAMP水平、腺苷酸环化酶和磷酸二脂酶的活性。4.采用实时定量PCR和蛋白印迹分别检测泡沫细胞中ABCA1的mRNA和蛋白水平的表达。结果：1.对氧磷以时间和剂量依赖的方式增加RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞中TC、FC和CE水平,降低ABCA1表达和胆固醇流出。2.对氧磷降低了细胞中cAMP的水平及腺苷酸环化酶(AC)的活性和增加磷酸二酯酶(PDE)的活性。3. cAMP的类似物双丁酰环腺苷酸(dBcAMP)能抑制对氧磷降低ABCA1表达和部分阻断对氧磷降低胆固醇流出的作用。4.AC激动剂福斯高林(Forskolin)和PDE抑制剂3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)能拮抗对氧磷降低cAMP的作用。结论：对氧磷下调鼠源巨噬细胞性泡沫细胞ABCA1的表达,降低细胞内胆固醇流出和增加细胞内胆固醇堆积可能与干预cAMP信号通路有关目的：观察外源性PON1基因转染对对氧磷促鼠源巨噬细胞性泡沫细胞形成的影响方法：1.实验分为以下各组：(1)RAW巨噬细胞组、(2)Ox-LDL+RAW巨噬细胞组、(3)对氧磷+Ox-LDL+RAW巨噬细胞组、(4)对氧磷+Ox-LDL+PON1(+)RAW巨噬细胞组。将外源性的人的PON1基因转染RAW264.7细胞,用Ox-LDL(50μg／ml)诱导泡沫细胞形成,对氧磷处理组加对氧磷(100μmol/1)共孵育48 h。2.油红染色进行形态学观察,高效液相色谱法测定细胞内TC及FC水平,计算CE水平,测定胆固醇流出率。结果：1.Ox-LDL+RAW细胞组细胞内TC、FC、CE水平和CE／T值与RAW细胞组相比显著性增高；对氧磷(100μmol/1)+Ox-LDL+RAW细胞组组细胞内TC.FC.CE水平及CE/TC较Ox-LDL+RAW细胞组均有显著性增加,而PON1转染拮抗了对氧磷的作用。2.Ox-LDL+RAW组细胞胆固醇流出率与RAW细胞相比显著性增加；与Ox-LDL+RAW细胞组相比,对氧磷(100μmol/l)处理组细胞胆固醇流出率显著性降低,而PON1转染拮抗了对氧磷的作用。结论：外源性对氧磷酶1抑制了对氧磷促进鼠源巨噬细胞性泡沫细胞形成的作用