拟南芥抗菌核病突变体的筛选分析及相关抗性基因研究

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由Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary引起的菌核病是一种世界性病害,其寄主和分布范围广泛,主要危害油料、蔬菜等作物,其中对我国油菜的危害尤为严重,甚至造成毁灭性的损失,但目前对该病的抗病和致病机制还不甚清楚。本研究以拟南芥为材料,在其T-DNA插入激活标签突变体库的基础上进行抗菌核病菌抗性增强的突变体的筛选,并对抗菌核病菌和抗草酸的候选基因进行克隆、超表达以及验证其功能,主要取得了如下结果:1.通过对T-DNA插入激活标签突变体库中的50000个突变体进行菌核病菌接种,获得了两个抗菌核病菌增强的突变体植株。2.克隆了由抑制消减杂交(SSH)获得的抗菌核病菌的侯选基因并构建了相应的超表达载体,然后转化野生型拟南芥获得转基因突变体。3.克隆了由Tail-PCR获得的抗草酸的侯选基因并构建了相应的超表达载体,然后转化野生型拟南芥获得转基因突变体。4.通过对转基因突变体的第三代种子进行Basta除草剂筛选已确定得到2个基因的纯合突变体植株。5.通过RT-PCR进一步验证了转基因突变体的纯/杂合关系及基因功能。研究结果为进一步对拟南芥抗菌核病抗源的寻找及其致病和抗病机制的研究奠定了基础。
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