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目的:通过构建小鼠感染布鲁菌模型,观察单体大黄素对布鲁菌感染小鼠的保护效果,体外培养小鼠巨噬细胞,研究大黄素对布鲁菌侵染小鼠巨噬细胞功能的调节,为寻找新的药物治疗布鲁菌病提供理论和实验依据。方法:1、体内实验:采用VITEK Compact 2全自动微生物分析系统、16SrDNA分子生物学方法,对实验室保存布鲁菌株进行再次鉴定;以不同浓度菌液注射小鼠,通过SAT和脾脏载菌初筛布鲁菌感染小鼠的浓度,然后以初筛浓度腹腔注射小鼠,构建布鲁菌感染小鼠模型;取60只SPF级BALB/c雌性小鼠随机平均分成6组,设为8mg/m L大黄素组、4mg/m L大黄素组、2mg/m L大黄素组、多西环素组、PBS组、空白组,进行灌胃处理(除空白组外)后,通过腹腔菌落计数、体重指数、肝脾指数及组织病理的变化评价大黄素对布鲁菌感染小鼠的保护效果。2、体外实验:取BALB/c小鼠分离骨髓细胞,加入MG-CSF诱导分化培养,用小鼠F4/80抗体、CD11b抗体标记细胞,流式检测骨髓细胞分化为巨噬细胞(MΦ)的比例;通过MTT法检测不同浓度大黄素对小鼠MΦ的存活率影响,同时以多西环素为对照,比较两种药物的IC50;用布鲁菌侵染小鼠巨噬细胞(MΦ和细菌比例为100:1)培养4 h,然后加入大黄素作用后,培养1 h、6 h、12 h、24 h、48 h,通过菌落计数法检测大黄素对MΦ内布鲁菌存活的影响,然后用q RT-PCR法检测大黄素对侵染布鲁菌的MΦ分泌TNF-α、IL-6、IFN-γ基因转录的影响,同时用ELISA法检测各组MΦ培养上清中TNF-α、IL-6、IFN-γ的含量。结果:1、体内实验结果:经过细菌生化、16SrDNA鉴定结果一致,均证实该实验菌株为羊布鲁菌;羊布鲁菌感染小鼠的初筛浓度为1×105CFU,并且该浓度布鲁菌感染小鼠模型构建成功;大黄素对布鲁菌感染小鼠模型的影响:8mg/m L和4mg/m L大黄素组腹腔载菌数量的lg CFU值分别为(4.023±0.199)(4.771±0.498),明显低于PBS组(5.161±0.501);2mg/m L、4mg/m L、8mg/m L大黄素组小鼠体重指数明显高于PBS组,而脾脏系数明显低于PBS组;8mg/m L大黄素组小鼠的肝脏系数明显低于PBS组,且与多西环素组无明显差异;与PBS组比较,2mg/m L、4mg/m L、8mg/m L大黄素组小鼠脾脏均有不同程度的改善,组织病理结构排列规则,白髓、红髓分界较清楚;8mg/m L大黄素组小鼠肝细胞分界清楚,排列正常。2、体外实验结果:培养第8天,骨髓细胞诱导分化为巨噬细胞的比例为91.28%;大黄素的IC50(608.4μg/m L)明显高于多西环素的IC50(225.5μg/m L);菌落计数结果:6 h、12 h、24 h、48 h大黄素组lg CFU值均显著低于空白组,大黄素组间比较,24 h大黄素组的lg CFU值最低,且低于多西环素组;q RT-PCR结果:24h大黄素组TNF-α、IL-6、IFN-γ表达水平比其他组高(1 h、6 h、12 h、48 h);相同时间点,大黄素组TNF-α基因表达水平均高于布鲁菌组。除1 h、12 h大黄素组外,其余各组IL-6表达比布鲁菌组高;6 h、12 h、24 h大黄素组比布鲁菌组的IFN-γ基因表达明显上调;12h大黄素组的IFN-γ基因表达(5.4370±0.458)最高,且与24 h大黄素组(5.3495±0.336)比较无明显统计学差异。ELISA结果:与布鲁菌组比较,6 h、12 h、24 h大黄素组TNF-α、IL-6、IFN-γ含量明显增加,24h大黄素组TNF-α、IL-6、IFN-γ含量最高;而12 h大黄素组IFN-γ含量(74.233±4.416)与24 h大黄素组(78.328±8.932)比较无统计学意义;结论:大黄素对感染布鲁菌小鼠具有保护小鼠,并呈浓度依赖性,其作用机制与增加TNF-α、IL-6、IFN-γ和小鼠巨噬细胞杀伤布鲁菌的能力有关系。