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目的:探索KiSS-1基因在敲除后对于鼻咽癌低转移性细胞株SUNE-1-6-10B转移能力的影响。 方法:(1)敲除鼻咽癌细胞株SUNE-1-6-10B中的KiSS-1基因,获得低表达KiSS-1基因的鼻咽癌细胞株;(2)将基因敲除前后的鼻咽癌细胞株分别注入裸鼠腋下,观察KiSS-1基因对肿瘤及其转移灶的影响。 结果:(1)利用CRISPR/Cas9技术成功敲除了低转移习性鼻咽癌细胞株SUNE-1-6-10B中的KiSS-1基因,并获得了能够稳定低表达KiSS-1基因的鼻咽癌细胞株。(2)提取敲除了KiSS-1基因的鼻咽癌细胞株中的DNA进行SURVEYOR验证,目的DNA片段PCR产物经T7EⅠ酶切后,出现两条额外的231bp和190bp的片段,说明 PCR产物经缓慢退火时不能完全配对,能被错配酶识别从而切断成两条小的DNA片段,证实CRISPR/Cas9系统成功在SUNE-1-6-10B细胞基因组上造成定点突变。提取基因敲除前后的 Kisspeptin蛋白(KiSS-1基因表达产物)进行Western blot验证,结果表明,Kisspeptin蛋白在敲除了KiSS-1基因的鼻咽癌细胞株中明显低表达。(3)将敲除了KiSS-1基因的鼻咽癌细胞株注入裸鼠腋下,每只裸鼠注入的细胞浓度为5×106/mL,细胞悬液量为2mL,将其作为实验组;将同等浓度和体积的未经 KiSS-1基因敲除的鼻咽癌细胞株 SUNE-1-6-10B注入裸鼠腋下,将其作为对照组。结果显示,实验组和对照组移植瘤的重量分别为6.72±0.37克和6.80±0.38克,两组数据之间无统计学差异(P>0.05)。实验组的鼻咽癌细胞肺脏转移灶生成率为40%,对照组的鼻咽癌细胞肺脏转移灶生成率为10%,两组数据之间具有统计学差异(P<0.05)。 结论:CRISPR/Cas9技术能够敲除低转移习性鼻咽癌细胞株SUNE-1-6-10B中的KiSS-1基因,KiSS-1基因具有抑制鼻咽癌细胞转移的作用。