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研究背景子痫前期(preeclampsia,PE)作为妊娠期特有的疾病,以高血压和蛋白尿为主要特征,全球发病率为4%-5%。其发病机制主要有胎盘浅着床、氧化应激、血管内皮损伤和免疫调节异常等,但子痫前期的确切病因仍未完全阐明。长链非编码RNA(long Noncoding RNA,lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸,但不编码蛋白质的RNA。既往研究发现,异常表达的lncRNA与子痫前期发生发展密切相关,推测lncRNA可能通过影响滋养细胞功能在子痫前期中发挥重要作用,为子痫前期提供前瞻性的诊断和治疗。我们对9例重症早发子痫前期胎盘和32例正常胎盘进行转录组测序,发现lncRNA SH3PXD2A-AS1在子痫前期胎盘中显著高表达。过表达lncRNA SH3PXD2A-AS1后抑制滋养细胞迁移、侵袭和增殖,促进细胞凋亡;敲除则相反。通过RNA pulldown和蛋白质谱发现93个lncRNA SH3PXD2A-AS1特异结合的蛋白,包括12个转录因子。进一步,通过数据库预测转录因子的靶基因,构建TF-Targets调控网络及与胎盘测序差异表达基因交集分析,发现转录因子CCCTC位点结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)与子痫前期最相关。RNA免疫共沉淀(RIP)实验也验证了两者相互结合。此外,我们通过qqRT-PCR、Western blotting(WB)、染色质免疫共沉淀(ChIP)和荧光素酶实验,验证了 lncRNA SH3PXD2A-AS1通过转录因子CTCF抑制SH3&PX区域2A(SH3 and PX domains 2A,SH3PXD2A)和趋化因子受体 7(CC-chemokine receotor 7,CCR7)表达。SH3PXD2A和CCR7可促进滋养细胞迁移侵袭及部分逆转lncRNA SH3PXD2A-AS1的抑制作用。因此我们推测lncRNA SH3PXD2A-AS1结合转录因子CTCF抑制SH3PXD2A和CCR7表达影响滋养细胞迁移侵袭功能,参与子痫前期发生发展,可成为子痫前期的一个新的预测和治疗标志物。研究目的明确lncRNA SH3PXD2A-AS1在子痫前期中的作用及其临床意义。阐明lncRNA SH3PXD2A-AS1在滋养细胞迁移、侵袭、增殖及凋亡中的作用。证实lncRNA SH3PXD2A-AS1结合转录因子CTCF抑制SH3PXD2A和CCR7表达影响滋养细胞功能,参与子痫前期发生发展这一假说。研究方法qRT-PCR检测lncRNA SH3PXD2A-AS1在胎盘中的表达水平;慢病毒过表达和CRISPR/Cas9敲除探索lncRNA SH3PXD2A-AS1在滋养细胞中的功能;Transwell、EdU和流式细胞术检测细胞迁移、侵袭、增殖和凋亡功能。采用生物信息学分析、FISH、核质分离、RNA pulldown、RIP、ChIP、荧光素酶、qRT-PCR 及 WB 等实验探讨 lncRNA SH3PXD2A-AS 1、CTCF 和 SH3PXD2A、CCR7的关系。研究结果1.LncRNA SH3PXD2A-AS1在子痫前期胎盘中显著高表达,其表达量与孕妇血压呈正相关。2.LncRNA SH3PXD2A-AS1过表达可抑制滋养细胞迁移、侵袭和增殖,促进细胞凋亡;敲除lncRNA SH3PXD2A-AS1则相反。3.通过FISH定位和核质分离实验证实lncRNA SH3PXD2A-AS1主要位于细胞核,且通过RNA pulldown、蛋白质谱和RIP技术验证lncRNA SH3PXD2A-AS1与转录因子CTCF相互结合。4.生物信息学预测、ChIP、荧光素酶、qRT-PCR及WB等实验,验证lncRNA SH3PXD2A-AS1通过转录因子CTCF结合SH3PXD2A和CCR7的启动子区并抑制其表达。5.SH3PXD2A和CCR7过表达可促进滋养细胞迁移侵袭功能及相关蛋白,且部分逆转lncRNA SH3PXD2A-AS1对滋养细胞迁移侵袭的抑制作用。研究结论1.子痫前期胎盘中lncRNA SH3PXD2A-AS1显著高表达,并与孕妇血压呈正相关。2.LncRNA SH3PXD2A-AS1抑制滋养细胞迁移、侵袭和增殖,促进细胞凋亡。3.LncRNA SH3PXD2A-AS1 结合转录因子 CTCF 下调 SH3PXD2A和 CCR7 表达,抑制滋养细胞迁移侵袭,参与子痫前期发生发展。