多年来,人们一直致力于肿瘤疫苗靶的研究,发现了一系列在正常睾丸及恶性肿瘤细胞内高度限制性表达的基因,即肿瘤-睾丸基因（cancer testis gene, CT基因）,这种基因因其限制性表达且部分表达产物可诱导机体产生体液和/或细胞免疫的特点被认为是理想的肿瘤疫苗靶。BRDT-NY基因是CT基因CT9（Bromodomain testis specific gene, BRDT基因）的新的不同剪接体,也是一种Bromodomain基因。应用RT-PCR的方法研究发现:BRDT-NY基因特异表达在人睾丸组织中,其他组织未见表达。目前,对BRDT-NY蛋白的表达研究国内外均未见报道。本研究目的如下:原核表达BRDT-NY基因不同功能结构域的三种蛋白,用这三种表达产物分别免疫小鼠,获得三种小鼠抗人BRDT-NY蛋白多克隆抗体。应用免疫组织化学方法对正常成人睾丸组织进行表达研究,观察三种BRDT-NY蛋白在组织、细胞中的表达情况,从而为进一步研究BRDT-NY基因提供线索;研究BRDT-NY蛋白在不同种类肿瘤、不同分化程度的同类恶性肿瘤细胞中的表达情况,以探讨BRDT-NY蛋白作为肿瘤疫苗靶的可能性。具体研究内容分为以下三部分:一、BRDT-NY基因片段的克隆、表达及表达蛋白的纯化参照BRDT-NY基因全长序列,设计三对针对其不同结构域的蛋白表达引物,以PCR法从质粒pTriplEx2-BRDT-NY中扩增目的基因,分别命名为BRDT-NY1、BRDT-NY2、BRDT-NY3。将其定向克隆到载体pET_28a+内,转化大肠杆菌BL21菌株,以IPTG诱导表达含有6×His-tag的BRDT-NY₁、BRDT-NY₂、BRDT-NY₃蛋白,并对其进行纯化、复性。二、鼠抗人BRDT-NY蛋白多克隆抗体的制备用BRDT-NY₁、BRDT-NY₂、BRDT-NY₃蛋白免疫8周龄的雄性BALB/c小鼠。ELISA实验证实,免疫小鼠血清内能够检测到针对BRDT-NY₁、BRDT-NY₂、BRDT-NY3蛋白的特异性抗体,为进一步的实验研究奠定了基础。Western-blot显示:仅Ab BRDT-NY1可检测正常成人睾丸组织中的BRDT-NY蛋白,可应用于下面的免疫组织化学实验。三、BRDT-NY蛋白在组织中的表达研究以小鼠抗人BRDT-NY1蛋白多克隆抗体为第一抗体检测BRDT-NY蛋白在正常成人睾丸组织、部分肿瘤组织（共44例）中的表达情况。正常成人睾丸组织免疫组化实验结果显示:BRDT-NY蛋白主要定位于圆形精子细胞的细胞核,而在其他生精细胞中未见表达或仅有微弱表达。这一结果表明BRDT-NY很可能在人精子细胞变态阶段起作用,这为我们进一步研究其在睾丸中的功能提供了线索。肿瘤组织中免疫组化实验结果显示:BRDT-NY蛋白广泛表达于多种恶性肿瘤细胞。14例食管癌中,有11例BRDT-NY蛋白表达阳性,而5例非肿瘤食管组织中,2例BRDT-NY蛋白表达阳性;10例胃癌中,BRDT-NY蛋白表达均为阳性,而10例非肿瘤胃组织中,有2例BRDT-NY蛋白表达阳性。该结果显示BRDT-NY蛋白在食管癌和胃癌中表达阳性率均较高,且与非肿瘤组织有显著性差异,有望作为这两种肿瘤诊断和治疗的分子靶。10例乳腺癌中,有8例BRDT-NY蛋白表达阳性;而7例非肿瘤乳腺组织中,有5例BRDT-NY蛋白表达阳性。该结果显示BRDT-NY蛋白在乳腺癌和正常乳腺组织中表达的阳性率均较高,但无显著性差异,因此尚不能作为乳腺癌治疗的分子靶。但其在乳腺癌和正常乳腺组织中表达的定位明显不同,有可能作为乳腺癌的病理诊断提供新的佐证,这还需扩大病例数量进一步研究。5例结肠癌、3例甲状腺癌、1例肺癌及1例卵巢癌中,BRDT-NY蛋白表达均为阳性;而在癌旁非肿瘤结肠组织和癌旁非肿瘤甲状腺组织中均未见BRDT-NY蛋白表达。因此BRDT-NY蛋白的检测对于这几种肿瘤诊断可能具有一定意义,但能否成为其诊断和治疗的分子靶还需扩大标本例数进行进一步研究。综上所述,BRDT-NY可作为肿瘤疫苗靶的候选成分。