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花生(Arachis hypogaea)和大豆(Glycine max)都是我国重要的农作物。花生黑腐病菌(Cylindrocladium parasiticum)是我国进境植物检疫性病原菌。2009年在我国广东省首次发现花生黑腐病菌的入侵和为害,引起严重的花生黑腐病和大豆红冠腐病。2010年,花生黑腐病菌被列入广东省农业植物检疫性有害生物补充名单。本文对花生黑腐病在广东省及周边地区发生和为害进行调查,对症状疑似花生黑腐病和大豆红冠腐病的几种花生和大豆的根茎部腐烂病害进行了鉴定;对花生黑腐病菌分子检测技术进行了研究,主要结果如下: 1.花生黑腐病的调查和鉴定。花生黑腐病在我国广东省的粤东、粤西、粤北和珠三角地区,以及江西省龙南县和福建省龙岩市等地均有发生。大多数地方属零星发病;但一些严重发病的地方,发病率高达30%。分子生物学研究表明:微管蛋白基因(β-tubulin)、组蛋白基因(histone)和翻译延伸因子基因(translation elongation factor)适合用于花生黑腐病菌的分子生物学鉴定;而钙调素基因(calmodulin)和肌动蛋白基因(actin)不适合用于花生黑腐病菌的分子生物学鉴定。基于微管蛋白基因、组蛋白基因和翻译延伸因子基因的单基因和多基因系统学分析结果表明:中国的花生黑腐病菌与美国的来源自花生寄主的花生黑腐病菌同源性较高。 2.花生新赤壳基腐病的鉴定。花生新赤壳基腐病的症状与花生黑腐病非常相似。根据病原菌的形态、致病性、环境扫描电镜下子囊孢子表面纹饰和分子生物学鉴定的结果,将该病菌鉴定为侵管新赤壳菌非洲变种(Neocosmospora vasinfecta var。africana),无性态为枝顶孢菌(Acremonium sp.)。子囊壳为球形或洋梨形,有孔口,短喙,大小为151-353×141-313μm。子囊为圆筒形至棍棒形,薄壁,大小为100-160×9-15μn,基部生一短柄,子囊内含8个子囊孢子,逐个单行排列在子囊中。子囊孢子为圆形至卵圆形,无色或黄白色,表面具纹饰,单胞,大小为7-16×7-12μm。在环境扫描电镜下,子囊孢子外壁为脑形纹饰。分生孢子为椭圆形至长卵圆形,无色,单胞,大小为2.5-14.8×1.2-4.9μm。 3.大豆新赤壳茎腐病的鉴定。大豆新赤壳茎腐病的症状与大豆红冠腐病症状非常相似。根据病原菌的形态、致病性、环境扫描电镜下子囊孢子表面纹饰和分子生物学鉴定的结果,将该病菌鉴定为侵管新赤壳菌侵管变种(N.vasinfecta var.vasinfecta),无性态为枝顶孢菌(Acremonium sp.)。子囊壳为球形或洋梨形,有孔口,具喙,160-298×151-235μm。子囊为长圆柱形至棒形,薄壁,具有短柄,大小为58-124×8-15μm,子囊内含8个子囊孢子。子囊孢子为球形至洋梨形,透明或黄白色,逐个单行整齐排列,表面具有纹饰,大小为14-17×8-12μm。在环境扫描电镜下,子囊孢子外壁为皱褶纹饰。分生孢子无色透明,卵圆形,无隔膜,大小为6-22×2-5μm。该病是我国的新记录。 4.大豆丛赤壳茎腐病的鉴定。大豆丛赤壳茎腐病的症状与大豆红冠腐病症状非常相似。根据病原菌的形态、致病性和分子生物学鉴定的结果,将该病菌鉴定为赤球丛赤壳(Nectria haematococca),无性态为茄腐镰刀菌(Fusarium solani)。子囊壳为球形至洋梨形,大小为197-260×226-358μm。子囊为圆柱形至棒形,大小为7.2-9.6×75.4-92.0μm,内含8个子囊孢子。子囊孢子为椭球形至倒卵形,双胞,中间隔膜处有溢缩,表面具有纹饰,大小为10.6-15.0×4.9-6.0μm。小型分生孢子通常为不对称的椭圆形或肾形,无隔膜或1个隔膜,两端钝圆,大小为2.5-5.2×7.6-29.4μm。大型分生孢子为柱形至镰刀形,两端较钝,薄壁,3-5个隔膜,大小为25.4-66.8×3.5-6.0μm。厚垣孢子为球形,大小为6.8-13.6×5.5-9.5μm。该病是我国的新记录。 5.花生黑腐病菌的分子检测。以花生黑腐病菌的微管蛋白基因序列与花生常见根茎部病害致病菌的微管蛋白基因序列进行比对,设计了一对特异性引物0420F/0420R用于分子检测。离体检测和人工接种发病的花生植株组织的检测结果证明:该引物对花生黑腐病菌能特异性扩增出279 bp的DNA片段,可用于花生黑腐病菌的检测。