胎膜早破(premature rupture of membrane,PROM)即母体临产前发生胎膜破裂,近年来其发病率呈上升趋势。导致胎膜早破的因素很多,研究发现PROM与感染密切相关,特别是革兰阴性菌引起的感染,易引起胎膜结构破坏,导致胎膜薄弱处发生破裂。破膜后,羊水抑菌作用减弱,可增加上行感染的机会,破膜时间超过24小时,感染率可增加5~10倍,合并绒毛膜羊膜炎的PROM孕妇,易发生胎盘早剥、产后出血、败血症等并发症;炎症侵及胎儿后,可导致胎儿宫内感染,严重时危及新生儿生命。临床常把产后一周内的新生儿定义为围产儿,我国PROM合并围产儿死亡率为2.5%~11%,因此,寻找可以早期诊断PROM及PROM合并围产儿感染的敏感性、特异性强的指标是产科医生面临的重要问题。白细胞分化抗原14(cluster of differentiation antigen,CD14)是细菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)的高亲和受体,CD14是单核-巨噬细胞表面的特异性标志物,CD14分子有两种存在形式:一种是位于细胞膜上的膜结合型CD14(m CD14),另一种是游离在体液中的可溶性CD14(s CD14),s CD14的主要作用是与病原体抗原相结合,并进一步介导机体炎症反应。研究发现破膜时间大于24小时患者羊水中的s CD14含量显著升高,同时伴有CRP、IL-6等炎症指标的升高,推测与羊膜腔的炎症发生有关。髓样细胞表达的触发受体1(triggering receptor 1 expressed on myeloid cells,TREM 1)是TREM家族活化型受体成员之一,在外周血中主要分布于中性粒细胞、巨噬细胞及成熟的单核细胞表面。正常情况下,TREM-1呈低水平表达,在机体感染时,数小时内可使其在白细胞表面大量表达,且与其配体结合后,启动并放大免疫反应,促进炎性因子分泌和诱导促炎症因子释放。近年来,TREM-1在感染性疾病诊断方面越来越受到重视。研究发现胎膜中TREM-1的水平变化与PROM及亚临床感染的发生具有明显相关性。目的本研究通过检测母血、脐血、新生儿外周血中s CD14及中性粒细胞表面TREM-1的表达水平及它们之间的相关性,探讨s CD14及中性粒细胞表面TREM-1在PROM及PROM围产儿感染中的临床意义。资料与方法1研究对象选取2014年7月~2015年7月在复旦大学附属中山医院青浦分院住院分娩的足月PROM初产孕妇60例作为PROM组,选取同期住院、因社会因素行剖宫产的正常妊娠妇女60例为对照组,两组孕妇均无母体合并症、无其他产科并发症及胎儿异常情况等。胎膜早破诊断标准参照谢幸、苟文丽主编的第八版《妇产科学》;绒毛膜羊膜炎诊断标准为:电镜下,每高倍镜视野胎盘或胎膜任何一处中性粒细胞浸润达11个及以上者;新生儿围产期感染(新生儿肺炎、新生儿坏死性小肠结肠炎及新生儿早发型败血症)诊断标准参照邵肖梅、叶鸿瑁等主编的第四版《实用新生儿学》。本研究符合医院伦理委员会伦理要求,入选对象均签署书面知情同意书。2实验方法2.1血液标本的采集和制备两组孕妇均于入院后未应用抗生素前抽取肘静脉血5ml、胎儿娩出后抽取脐静脉血5ml、新生儿产后第一天抽取静脉血1.5ml,母血、脐血、新生儿外周血标本各采集两管,一管为EDTA抗凝,全血标本保存,6小时内应用流式细胞术检测;另一管血液标本置于普通无菌干燥试管中,待其自然凝固,于2500 r/min离心5min后,留取上清,置于-80℃冰箱保存。2.2绒毛膜羊膜炎的检查胎盘娩出后,分别取大小约2.0cm×2.0cm的胎盘及胎膜组织,生理盐水清洗后置于10%甲醛溶液中固定,HE染色后行胎盘病理学检查,绒毛膜羊膜炎诊断标准为:电镜下,每高倍镜视野中胎盘或胎膜任何一处中性粒细胞浸润达11个及以上者。2.3 s CD14和中性粒细胞表面TREM-1表达水平的检测采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测母血、脐血、新生儿外周血中s CD14的表达水平,采用流式细胞术检测母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1的表达水平,具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。3统计学方法使用SPSS 20.0统计软件处理数据,图表制作统一使用Graph Pad Prism 5软件,计量资料满足正态分布采用两独立样本均数t检验,所有计量资料采用均数±标准差(x±s)表示,相关性分析采用Pearson相关性分析,以α=0.05为检验水准。结果1研究对象一般情况的比较PROM组和对照组产妇年龄、胎龄、新生儿Apgar评分(1min,5min)、新生儿体重差异均无统计学意义(P>0.05),且两组新生儿间性别比较χ2=0.07,P=0.80,无统计学意义。2 PROM组和对照组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14和中性粒细胞表面TREM-1的表达水平2.1 PROM组和对照组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14的表达水平PROM组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14的表达水平分别为(56.89±13.64)、(55.50±12.52)、(60.08±13.55)ng/ml,明显高于对照组的(35.64±2.85)、(32.31±4.25)、(35.78±4.71)ng/ml;两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.2 PROM组和对照组母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1的表达水平PROM组母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1平均荧光强度(median fluorescence intensity,MFI)的表达水平分别为(11.21±2.43)、(10.71±2.73)、(11.41±2.80),明显高于对照组的(7.30±2.14)、(5.49±1.21)、(6.27±1.72);两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。3相关性分析3.1 PROM组与对照组母血中s CD14和中性粒细胞表面TREM-1表达水平分别与脐血中两者水平的相关性PROM组母血中s CD14的水平与脐血中s CD14的水平呈正相关,r=0.904,P<0.05;PROM组母血中性粒细胞表面TREM-1的水平与脐血中性粒细胞表面TREM-1的水平呈正相关,r=0.882,P<0.05。对照组母血中s CD14和中性粒细胞表面TREM-1的表达水平与脐血中两者的水平均无明显相关性(r分别为0.404,0.382)。3.2 PROM组与对照组母血中s CD14和中性粒细胞表面TREM-1的表达水平分别与新生儿外周血中两者水平的相关性PROM组母血中s CD14的水平与新生儿外周血中s CD14的水平呈正相关性,r=0.892,P<0.05;PROM组母血中性粒细胞表面TREM-1的水平与新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1的水平呈正相关性,r=0.857,P<0.05。对照组母血中s CD14和中性粒细胞表面TREM-1的表达水平与新生儿外周血中两者的水平均无明显相关性(r分别为0.444,0.482)。3.3 PROM组与对照组脐血中s CD14、中性粒细胞表面TREM-1的表达水平分别与新生儿外周血中两者水平的相关性PROM组脐血中s CD14的水平与新生儿外周血中s CD14的水平呈正相关性,r=0.894,P<0.05;PROM组脐血中性粒细胞表面TREM-1的水平与新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1的水平呈正相关性,r=0.866,P<0.05。对照组脐血中s CD14和中性粒细胞表面TREM-1的水平与新生儿外周血中两者的水平均无明显相关性(r分别为0.342,0.387)。3.4 PROM组s CD14和中性粒细胞表面TREM-1的相关性PROM组母血中s CD14和中性粒细胞表面TREM-1呈正相关性,r=0.808,P<0.05;脐血中s CD14和中性粒细胞表面TREM-1呈正相关性,r=0.808,P<0.05;新生儿外周血中s CD14和中性粒细胞表面TREM-1呈正相关性,r=0.772,P<0.05。4不同破膜时间组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14和中性粒细胞表面TREM-1的表达水平PROM组按破膜时间(小时,h)分为三组:破膜时间12h~24h组(A1组,n=30),破膜时间24h~36h组(A2组,n=21),破膜时间>36 h组(A3组,n=9)。4.1不同破膜时间组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14的表达水平A1组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14分别是(48.3±7.2)、(48.6±6.3)、(51.5±7.0)ng/ml;A2组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14分别是(59.9±11.8)、(56.1±11.0)、(63.5±12.3)ng/ml;A3组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14分别是(78.5±3.6)、(76.9±4.5)、(80.5±5.0)ng/ml。三组间比较显示,母血、脐血、新生儿外周血中s CD14的表达水平,随破膜时间的延长而升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。4.2不同破膜时间组母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1的表达水平A1组母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1分别是(9.7±1.1)、(11.3±1.3)、(15.9±1.1);A2组母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1分别是(9.2±1.2)、(10.5±1.7)、(16.1±1.5);A3组母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1分别是(9.7±1.1)、(11.6±1.6)、(16.7±1.7);三组间比较显示,母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1的表达水平,随破膜时间的延长而升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。5绒毛膜羊膜炎组与非绒毛膜羊膜炎组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14和中性粒细胞表面TREM-1的表达水平PROM组按胎盘胎膜病理学检查结果,分为绒毛膜羊膜炎组和非绒毛膜羊膜炎组,PROM组有26例诊断为绒毛膜羊膜炎(B1组,n=26),有34例诊断为非绒毛膜羊膜炎(B2组,n=34)。5.1绒毛膜羊膜炎组与非绒毛膜羊膜炎组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14的表达水平绒毛膜羊膜炎组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14分别是(63.7±12.3)、(60.8±12.4)、(66.5±12.5)ng/ml;非绒毛膜羊膜炎组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14分别是(45.2±5.7)、(46.3±5.5)、(49.0±6.2)ng/ml。两组间比较结果显示,PROM合并绒毛膜羊膜炎组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14的表达水平显著高于非绒毛膜羊膜炎组,差异均有统计学意义(P<0.05)。5.2绒毛膜羊膜炎组与非绒毛膜羊膜炎组母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1的表达水平绒毛膜羊膜炎组母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1分别是(12.3±2.4)、(11.9±2.8)、(12.7±2.7);非绒毛膜羊膜炎组母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1分别是(9.3±0.9)、(8.7±0.8)、(9.2±0.9)。两组间比较结果显示,PROM合并绒毛膜羊膜炎组母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1的表达水平显著高于非绒毛膜羊膜炎组,差异均有统计学意义(P<0.05)。6围产儿感染组与围产儿非感染组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14和中性粒细胞表面TREM-1表达水平根据PROM组孕妇所产新生儿围产期(产后7日内)结局,PROM组共有14例确诊为围产儿感染(C1组,n=14),其中新生儿肺炎10例、新生儿坏死性小肠结肠炎2例、新生儿早发型败血症2例。有46例确诊为围产儿非感染(C2组,n=46)。6.1围产儿感染组与围产儿非感染组母血、脐血、新生儿外周血s CD14的表达水平围产儿感染组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14分别是(77.4±7.29)、(75.1±6.6)、(80.1±7.7)ng/ml;围产儿非感染组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14分别是(50.7±7.7)、(49.5±6.1)、(54.0±7.8)ng/ml。两组间比较结果显示,围产儿感染组母血、脐血、新生儿外周血中s CD14的表达水平显著高于围产儿非感染组,差异均有统计学意义(P<0.05)。6.2围产儿感染组与围产儿非感染组母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1表达水平围产儿感染组母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1分别是(14.6±2.4)、(14.4±2.8)、(15.1±2.8);围产儿非感染组母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1分别是(10.2±1.3)、(9.6±1.4)、(10.3±1.6)。两组间比较结果显示,围产儿感染组母血、脐血、新生儿外周血中性粒细胞表面TREM-1的表达水平显著高于围产儿非感染组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论s CD14和中性粒细胞表面TREM-1的表达与胎膜早破及感染的发生、发展密切相关,对胎膜早破及胎膜早破围产儿感染的早期诊断具有一定的临床指导价值。