停乳链球菌内蒙古分离株MIG基因的克隆和表达

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停乳链球菌是引起奶牛乳房炎的主要病原菌,根据GenBank中登陆的停乳链球菌表面蛋白MIG基因序列,设计一对引物,采用PCR的方法从临床分离的停乳链球菌内蒙分离株基因组DNA中扩增出MIG基因,得到一条约1900 bp的片段。将其连入PMD-19T载体中,经酶切,PCR及序列测定法进行鉴定。结果表明,MIG基因与GenBank中停乳链球菌MIG基因(AF354651)序列的同源性为95%。构建原核表达载体PET-32a(+)-MIG,随后转化到大肠杆菌BL21(DH5a)中表达。表达产物进行SDS-PAGE分析后,表达的重组蛋白大小为89 ku。将纯化的MIG重组蛋白免疫家兔,用ELISA检测其血清抗体。用制备出的抗血清与链球菌全菌进行玻片凝集试验,出现凝集颗粒。结果表明MIG重组蛋白具有较强的免疫原性,为停乳链球菌疫苗的研制奠定基础。
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